沉默HMGA2對肺腺癌A549細胞的影響及與Notch1表達的關(guān)系并肺癌患者臨床病例特點分析.pdf

1、目的:HMGA2蛋白是一種結(jié)構(gòu)性轉(zhuǎn)錄因子，能夠正性、負性調(diào)節(jié)許多基因的轉(zhuǎn)錄。HMGA2并未直接調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄，而是通過AT-hook與DNA結(jié)合，改變DNA的結(jié)構(gòu)，進而調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄，或者是直接與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，改變轉(zhuǎn)錄活性。利用小于擾RNA(siRNA)技術(shù)在肺腺癌A549細胞中沉默HMGA2，觀察沉默該基因?qū)毎L、凋亡的影響，并進一步研究其對Notch信號通路分子Notch1表達的影響，探討HMGA2對Notch信號通路的影響。分析180例肺

2、癌患者的病例特點，探討肺癌發(fā)病情況的變化及免疫組化指標(biāo)在肺癌臨床診治的作用。
　　方法:化學(xué)合成HMGA2的siRNA，應(yīng)用脂質(zhì)體2000將siRNA轉(zhuǎn)染進肺腺癌A549細胞。利用實時熒光定量QRT-PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染24小時后細胞內(nèi)HMGA2基因表達下降的情況及Notch1基因表達變化。應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡法(westernblot)檢測轉(zhuǎn)染48小時后細胞HMGA2蛋白、Notch1蛋白表達的變化。轉(zhuǎn)染48小時后在相差顯微鏡下觀察

3、細胞形態(tài)變化。應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率及轉(zhuǎn)染后細胞凋亡率的變化。應(yīng)用CCK8檢測轉(zhuǎn)染后細胞增殖率的變化。對我院胸外科2015年1月至2015年6月手術(shù)治療后病理確診的肺癌患者病歷進行回顧性分析，采用SPSS20.0進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:(1)用帶熒光標(biāo)記的siRNA轉(zhuǎn)染6小時后，應(yīng)用流式細胞儀檢測到的轉(zhuǎn)染率為95％，表明siRNA可成功轉(zhuǎn)染進細胞。(2)將化學(xué)合成的siRNA轉(zhuǎn)染入A549細胞48小時后觀察細胞形態(tài)，細胞回縮

4、，形態(tài)不規(guī)則，細胞之間空隙增大。(3)QRT-PCR分別檢測轉(zhuǎn)染后HMGA2與Notch1的表達，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后siRNA鏈1的HMGA2的表達下降67％以上，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。轉(zhuǎn)染組Notch1的表達下降，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。轉(zhuǎn)染組Notch1的表達與陰性對照組比較下降了約60％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。(4)Westernblot檢測轉(zhuǎn)染48小時后細胞HMGA2蛋白和Notch1蛋白表達變化，結(jié)果示轉(zhuǎn)染siRNA能夠成功

5、下調(diào)A549細胞中HMGA2的蛋白表達，同時觀察到siRNA-HMGA2轉(zhuǎn)染組Notch1蛋白表達水平的下降。(5)應(yīng)用CCK8方法檢測沉默HMGA2對細胞增殖的影響，結(jié)果示siRNA沉默HMGA2基因后A549細胞增殖率降低。(6)流式細胞術(shù)檢測siRNA轉(zhuǎn)染72小時后細胞凋亡率較對照組升高。(7)180例肺癌患者中腺癌所占構(gòu)成比為66.7％，高于鱗狀細胞癌9.4％。在男性患者中腺癌所占比例(51.4％)也大于鱗癌(21.6％)。(8