2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、目的:利用基因轉(zhuǎn)染和RNA干擾技術(shù),化學(xué)合成靶向人類膜型基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MT1-MMP)的小片段RNA,探討siRNA-MT1-MMP對(duì)人類A549細(xì)胞MT1-MMP基因mRNA及蛋白表達(dá)的影響。
　　方法:根據(jù)人類MT1-MMPmRNA序列(NM_4323)設(shè)計(jì)并合成三個(gè)不同的siRNA寡核苷酸片段序列。實(shí)驗(yàn)分為五組,空白對(duì)照組,陰性對(duì)照組(加入siRNA-NC),RNAi組(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3)

2、。利用核酸轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)最佳轉(zhuǎn)染比例(LipofectamineTM2000∶siRNA)及轉(zhuǎn)染效率,分別于轉(zhuǎn)染后24、48h采用qRT-PCR方法檢測(cè)MT1-MMPmRNA水平,用Westernblot方法檢測(cè)MT1-MMP蛋白質(zhì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果:設(shè)計(jì)合成的siRNA能成功轉(zhuǎn)染肺腺癌A549細(xì)胞中,流式細(xì)胞儀確定最佳轉(zhuǎn)染比例為(1∶2),瞬時(shí)轉(zhuǎn)染A54

3、9細(xì)胞12小時(shí)后的轉(zhuǎn)染效率高達(dá)80.18％。在轉(zhuǎn)染24h、48h后,收集各組細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,各干擾組與空白組比較時(shí)MT1-MMP基因表達(dá)量明顯下調(diào),其中干擾組(siRNA-3)48小時(shí)的有效抑制率可達(dá)到90%,蛋白質(zhì)水平明顯下調(diào)。陰性對(duì)照組和空白組中MT1-MMP的表達(dá)量無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功的利用RNAi技術(shù),有效地抑制肺腺癌A549細(xì)胞中MT1-MMP基因的表達(dá),為進(jìn)一步探討MT1-MMP在肺癌轉(zhuǎn)

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