SiRNA沉默F(xiàn)GFR3基因表達(dá)對(duì)肺癌A549細(xì)胞侵襲性的影響.pdf

1、目的：探討人成纖維細(xì)胞生長因子3（Fibroblast growth factor3，F(xiàn)GFR3）基因沉默對(duì)人類肺腺癌A549細(xì)胞侵襲能力及其對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶9（Matrix metaloproteinases9，MMP9）及基因表達(dá)的影響。
　　方法：細(xì)胞分為3組：A組：實(shí)驗(yàn)組，即FGFR3特異性小干擾RNA(Small interfering RNA，siRNA)(siRNA-FGFR3)干擾組；B組：陰性對(duì)照組，即FGFR3

2、非特異性陰性對(duì)照siRNA（siRNA-NC）干擾組；C組：空白對(duì)照組，無siRNA干擾；通過核酸轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體LipofectamineTM2000（Lipo2000）轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞；倒置熒光顯微鏡觀察Lipo2000轉(zhuǎn)染效率；轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞的侵襲能力用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time quantitative polymerase chain reaction，Real-time PCR

3、)用于檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后FGFR3及MMP9 mRNA的表達(dá)水平；蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后FGFR3及MMP9蛋白質(zhì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果：Lipo2000介導(dǎo)的FAM-siRNA對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可達(dá)80％；在轉(zhuǎn)染36 h后，Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示A組較B組、C組侵襲能力顯著降低(P＜0.01)。Real-time PCR結(jié)果顯示，A組較B、C組的FGFR3和MMP9基因表達(dá)量明顯下調(diào)（P