Hsulf-1過表達對肺腺癌細胞系A549凋亡的影響并老年肺癌病例分析.pdf

1、早期肺癌多不易被發(fā)現(xiàn)，臨床中許多患者確診已是中晚期，錯過了最佳手術時機，所以多采用傳統(tǒng)化療及放療方法治療腫瘤疾病。但由于傳統(tǒng)放化療方法自身的局限性，腫瘤的治療效果并不十分理想，因此，探索新的治療方案是目前腫瘤研究的熱點。
　　目的:利用轉染技術誘導Hsulf-1在肺腺癌細胞系A549中過表達，觀察其對細胞凋亡的影響，探討Hsulf-1在抑制細胞生長、促進細胞凋亡中的作用。為Hsulf-1能否成為臨床肺癌治療的新方法提供實驗依據(jù)。分

2、析老年肺癌病例，證實體檢對肺癌的早期診斷與及時診斷具有重要的臨床價值。
　　方法:人工合成質(zhì)粒以誘導Hsulf-1在肺腺癌細胞系A549中過表達，應用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000將合成的攜帶Hsulf-1的質(zhì)粒轉染到肺腺癌A549細胞內(nèi)，在相差倒置顯微鏡下觀察轉染48小時后細胞形態(tài)學變化;應用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術檢測不同轉染細胞組之間Hsulf-1mRNA的表達差異;應用免疫印跡法(Western

3、blot)技術檢測不同轉染細胞組之間Hsulf-1蛋白的表達差異;應用流式細胞術檢測不同轉染細胞組之間凋亡率的差異。選擇老年肺癌病例進行分析，并與術后病理結果對比，探討影像學檢查對早期發(fā)現(xiàn)肺癌的臨床意義。
　　結果:將人工合成攜帶Hsulf-1的質(zhì)粒通過脂質(zhì)體LipofectamineTM2000轉染入肺腺癌細胞系A549并成功表達后，腫瘤細胞的生長狀態(tài)受到明顯抑制，同時凋亡增加。相差倒置顯微鏡觀察轉染前后形態(tài)變化:轉染前，細胞貼

4、壁生長情況良好，細胞形態(tài)呈扁平樣，向四周伸出多個突起，細胞內(nèi)可見圓形細胞核，核仁一至多個;轉染后48小時，細胞呈現(xiàn)凋亡形態(tài)，貼壁不佳，漂浮細胞增多，核膜破裂，細胞皺縮成團，突起消失。RT-PCR檢測Hsulf-1mRNA的表達，結果表明經(jīng)過質(zhì)粒轉染的A549細胞，Hsulf-1的mRNA表達水平明顯上調(diào)，分別對比空白對照組、陰性對照組Hsulf-1mRNA的表達水平，轉染組的上調(diào)變化有統(tǒng)計學差異。說明攜帶Hsulf-1基因的質(zhì)粒可特異性

5、提高Hsulf-1mRNA在細胞中的表達。Westernblot檢測Hsulf-1蛋白的表達，結果表明，轉染組Hsulf-1蛋白的表達水平在質(zhì)粒轉染A549細胞48小時后明顯提高，分別對比空白對照組、陰性對照組Hsulf-1蛋白的表達水平，轉染組的上調(diào)變化有統(tǒng)計學差異。說明攜帶Hsulf-1基因的質(zhì)粒可特異性提高Hsulf-1蛋白在細胞中的表達。流式細胞術檢測細胞凋亡率:結果顯示空白對照組(0.58±0.21)％，陰性對照組(0.74±

6、0.13)％，轉染組(19.53±0.32)％，說明Hsulf-1過表達可使細胞凋亡增加。病例的75％其影像學結果與病理報告一致，體檢可以作為早期發(fā)現(xiàn)肺癌的重要手段。
　　結論:通過轉染質(zhì)粒靶向提高Hsulf-1基因在肺腺癌細胞系A549中的表達水平可使A549細胞凋亡明顯增加，同時細胞生長受到抑制，Hsulf-1可能成為治療肺癌的一個新的基因靶點。影像學發(fā)現(xiàn)有小結節(jié)表現(xiàn)的患者，可長期隨診，對于近期突然進行性變化需警惕癌變可能。體