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文檔簡介
1、目的:原發(fā)性干燥綜合征除累及外分泌腺體外尚可因腺體外其他器官的受累而出現(xiàn)多系統(tǒng)損害的癥狀。其中肺間質(zhì)病變是其死亡的主要原因,故pSS-ILD已成為臨床及免疫學研究的熱點,我們在前期的研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)pSS-ILD發(fā)病與TNF-α、TGF-β1和MMP9過度釋放導致肺泡炎癥密切相關,而TNF-α、TGF-β1和MMP9大量分泌與NF-κB信號通路的激活,繼而通過TLR結(jié)合MyD88引起IRAK1磷酸化,之后激活TRAF6,形成MyD88-I
2、RAK1-TRAF6信號復合體來完成。因此,我們提出假設:PSS-ILD發(fā)病與miR-146a及其靶基因IRAK1、TRAF6的表達相關。為證實這一假說,我們將評估pSS-ILD患者外周血單個核細胞中miR-146a及其靶基因IRAK1、TRAF6的表達情況,同時與健康對照者pSS患者比較,為pSS-ILD患者尋求新的治療靶點。
方法:1.篩選并收集原發(fā)性干燥綜合征并肺間質(zhì)病變病例并簽署知情同意書,予免疫抑制劑序貫治療,采集外
3、周血備檢。2.分離各組外周血單個核細胞(PBMC)提取總RNA,通過FQ-PCR、RT-PCR檢測miR-146a/靶基因TRAF6、IRAK1的表達,統(tǒng)計分析各組結(jié)果是否具有統(tǒng)計學意義。3.ELISA檢測TNF-α、IL-2、IL-1β,分析各組細胞因子在發(fā)病中的作用及其與miR-146a是否具有相關性。4.檢測收集各組患者臨床指標ESR、CRP、IgA、IgM、IgG。統(tǒng)計學分析其與miR146a,IRAK-1,TRAF-6之間是否
4、存在線性關系。5.通過統(tǒng)計學分析,推論miR146a/IRAK-1、TRAF-6是原發(fā)性干燥綜合征并肺間質(zhì)病變潛在治療靶點。
結(jié)果:①研究結(jié)果表明miR-146a在患者組(pSS和pSS-ILD)其相對表達量明顯低于健康組(n=10,P<0.05),在pSS患者組其相對表達量明顯低于pSS-ILD患者組(n=10,P<0.05)。②IRAK1其相對表達量在pSS組明顯低于健康對照組(n=10,P<0.05);pSS-ILD組明
5、顯高于健康對照組(n=10,P<0.05);pSS組明顯低于pSS-ILD組(n=10,P<0.05)。③TRAF6的相對表達量在患病組(pSS和pSS-ILD)明顯低于健康對照組(n=10,P<0.05);而pSS組和pSS-ILD組無明顯差異。④TNF-α在健康對照組明顯低于患病組(pSS和pSS-ILD),(n=10,P<0.05);在pSS組和pSS-ILD組無明顯區(qū)別。⑤IL-1β在健康對照組的相對表達量明顯低于患病組(pSS
6、和pSS-ILD),(n=10,P<0.05);且在pSS組低pSS-ILD組(n=10,P<0.05)。⑥IL-2在健康對照組的相對表達量明顯低于患病組(pSS和pSS-ILD)(n=10,P<0.05);且在pSS組低組pSS-ILD組(n=10,P<0.05)。⑦MiR-146a對IRAK-1、TRAF-6及其下游炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-2起負調(diào)節(jié)作用。miR-146a負調(diào)節(jié)IRAK-1(r=-0.987,P<0.0
7、1),miR-146a負調(diào)節(jié)TRAF-6(r=-0.998,P<0.01)。miR-146a負調(diào)節(jié)TNF-α(r=-1.000,P<0.01),miR-146a負調(diào)節(jié)IL-1β(r=-1.000,P<0.01),miR-146a負調(diào)節(jié)IL-2(r=-0.991,P<0.01)。⑧Spearman線性關系分析顯示miR146a、IRAK-1、TRAF-6與臨床指標ESR、CRP、IgA、IgM、IgG無明顯相關性。
結(jié)論:研究結(jié)
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