MAPK和MPF在小鼠卵母細(xì)胞激活后核仁前體(NPBs)融合中的作用.pdf

1、核仁是細(xì)胞進(jìn)行核糖體RNAs（rRNAs）合成、加工以及與蛋白組裝形成核糖體的場(chǎng)所。卵母細(xì)胞受精后，在原核中形成核仁前體（NPBs）。盡管有研究顯示NPBs的組裝，生長(zhǎng)和相互融合依賴于原核轉(zhuǎn)錄活動(dòng)和卵母細(xì)胞成熟過程產(chǎn)生的胞質(zhì)因子，但從M期向G1期過渡時(shí)核仁前體融合和運(yùn)動(dòng)的機(jī)制還不清楚。我們通過信號(hào)通路抑制劑/激活劑處理、顯微鏡觀察以及蛋白激酶活性分析等方法研究了小鼠卵母細(xì)胞激活后MAPK和MPF在NPBs融合中的作用。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

2、
　　 1.小鼠卵母細(xì)胞原核中先形成多個(gè)分散的小NPBs，然后這些NPBs逐漸融合，最終形成一個(gè)大NPB。
　　 2.酒精激活后3.9小時(shí)原核中出現(xiàn)多個(gè)小NPBs，經(jīng)過5.5小時(shí)融合成一個(gè)大NPB，到15.1小時(shí)消失。SrCh處理6h時(shí)，在開始激活后3.8小時(shí)出現(xiàn)多個(gè)小NPBs，4.5小時(shí)融合成一個(gè)大NPB，到18.7小時(shí)消失。
　　 3.酒精激活后1小時(shí)MPF活性就下降到最低，而MAPK活性直到激活后3小時(shí)才開

3、始下降；SrCl2處理6小時(shí)激活后MPF和MAPK活性發(fā)生類似變化，只是MAPK高活性維持3小時(shí)以上。
　　 4.酒精激活后用MAPK抑制劑U0126或MPF激活劑MG132處理都阻止NPBs融合，但用MPF抑制劑ROS處理則不影響NPBs融合。SrCl2處理5min后或處理6小時(shí)過程中用U0126和MG132處理也得到了相同的結(jié)果。
　　 5.酒精和SrCl2處理激活后不同時(shí)間用U0126和MG132處理發(fā)現(xiàn)，激活后頭

4、2小時(shí)MAPK高活性的維持為NPBs融合所必需，但MPF高活性維持時(shí)間越長(zhǎng)，NPBs融合越差。
　　 6.新鮮卵在SrCl2激活（6h）過程中，用信號(hào)通路抑制劑/激活劑處理對(duì)NPBs融合的影響與hCG后18小時(shí)卵類似。
　　 7.卵母細(xì)胞在體內(nèi)老化過程中MPF和MAPK活性不斷下降，NPBs的融合能力也下降。
　　 總之，小鼠卵母細(xì)胞激活后MAPK高活性至少要維持2小時(shí)，而MPF活性則必須馬上下降，NPBs才能融