昆白小鼠卵母細(xì)胞激活與孤雌胚體外發(fā)育.pdf

1、昆白小鼠卵母細(xì)胞激活與孤雌胚體外培養(yǎng)摘要昆白小鼠是我國自主繁殖的近交系小鼠，由于其遺傳背景清楚、生殖周期短、環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是國內(nèi)良好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。本研究以昆白小鼠為研究對象，分離了子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞，對卵母細(xì)胞的孤雌激活、孤雌胚胎的發(fā)育潛能進(jìn)行了研究，探討了影響孤雌激活和發(fā)育的幾個(gè)因素，為孤雌胚胎干細(xì)胞的分離、建系提供一些基礎(chǔ)。主要內(nèi)容有以下幾點(diǎn):1.37℃下2.smgmL胰蛋白酶0.04%EDTA30min消化子宮內(nèi)膜，結(jié)合刮

2、取法，能獲得活力高、數(shù)目多、細(xì)胞比較單一的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞，子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的活力隨著細(xì)胞培養(yǎng)代數(shù)的增加而下降(唾哇藍(lán)法檢測)。27%乙醇刺激小鼠卵母細(xì)胞，激活5~7min時(shí)其激活效果及孤雌胚發(fā)育較好，其桑囊胚發(fā)育率可達(dá)29一7%3.SrC12激活小鼠卵母細(xì)胞時(shí)，6~10rn團(tuán)。比為最佳處理濃度，3一6h為最佳激活時(shí)間，其桑囊胚發(fā)育率可達(dá)16.67%。4.在復(fù)合激活中，7%乙醇激活smi百在聯(lián)合Zlnlnol幾6一DMAP巧?？cB激

3、活3h效果最佳，其桑囊胚發(fā)育率高達(dá)35.7%。5.添加巧%FBS的CZB和mM16培養(yǎng)液均能較好地支持2一cen胚胎發(fā)育到囊胚(27.2%，26.3%)。同時(shí)，添加FBs的czB和mM16組的囊胚發(fā)育率也均顯著高于相應(yīng)的添加BsA組(P0刀1)。6.巧%FBS的CZB和mM16培養(yǎng)液進(jìn)行孤雌胚培養(yǎng)時(shí)，胚胎在mM16培養(yǎng)液中僅有7.45%突破2一en阻滯。但在CZB培養(yǎng)液中有引.“%能發(fā)育通過2一cen期并有29.17%到達(dá)桑囊胚。7.昆

4、明小鼠Mn卵母細(xì)胞激活后在含巧%FBS的CZB培養(yǎng)液中可較好地克服2一cen阻滯并形成桑囊胚。在培養(yǎng)48h添加1.lmgmL葡萄糖對胚胎的繼續(xù)發(fā)育有利。8顆粒細(xì)胞、輸卵管上皮細(xì)胞和小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞與小鼠孤雌胚胎共培養(yǎng)24h，共培養(yǎng)組胚胎與對照組大部分都能進(jìn)行分裂。而從2一cen期進(jìn)入4一8一ceU期，CZB與顆粒細(xì)胞共培養(yǎng)組的胚胎發(fā)育無差異，但輸卵管、子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞共培養(yǎng)的胚胎要稍好一些(49.12%，48一23%)。CZB培養(yǎng)的

5、桑囊胚發(fā)育率(32.9%)略低于其它三個(gè)共培養(yǎng)組的胚胎發(fā)育率(36.84%，38.71%，38.82%)(P0.05)。因此，共培養(yǎng)細(xì)胞對孤雌胚的發(fā)育有一定的促進(jìn)作用。關(guān)鍵詞:昆白小鼠孤雌激活孤雌生殖共培養(yǎng)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞。8.Granulosacells、0viductePitheliumceI1sandEndometriaIePitheliumcellswereculturedwithmouseParthenogeneticin24

6、h，theco一culturedgrouPandthecomP幼sedgrouPwerePartlydivided.AlthoughfromZ一cellinio4~8一cell，embryosdeveloPmentwerenodiferencesinCZBandgranulosacellsco一culturedgro叩，embryosofoviductePitheliumceIlsandendometrialePitheIiumcell

7、swerebeter(49.12%，48.23%)ThedeveloPmentrateofmorulaandblastocystinCZBmediumwaslowerthanothersTheco一culturedcellshadefectoncontinuousdevelopmentofpart11enogeneticemb斗05.KEYWORDS:KBmouseParthenogeneticactivationPart】lgenog