一個(gè)遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不良Ⅰ型家系的致病基因研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2 0 1 2 級(jí)碩士學(xué)位論文一個(gè)遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不良I 型家系的致病基因研究R e s e a r c h o nt h e d i s e a s e —c a u s i n gg e n e i nah e r e d i t a r yd e n t i n d y s p l a s i at y 7 p eIf a m i l y課題來(lái)源：國(guó)家自然科學(xué)基金( 編號(hào)：3 1 3 7 1 2 7 9 )廣東省自然科

2、學(xué)基金( 編號(hào)：$ 2 0 1 2 0 1 0 0 0 9 5 5 1 )學(xué)位申請(qǐng)人 陽(yáng)奇導(dǎo) 師 姓 名 徐湘民教授專(zhuān) 業(yè) 名 稱(chēng) 遺傳學(xué)培 養(yǎng) 類(lèi) 型 學(xué)術(shù)型培 養(yǎng) 層 次 碩士研究生所 在 學(xué) 院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院答辯委員會(huì)主席 張學(xué)教授答辯委員會(huì)委員 曾令文研究員王 瑩教授趙存友教授韋相才教授2 0 1 5 年4 月1 6 日 廣州摘要方面，斑馬魚(yú)中調(diào)控牙齒發(fā)育的基因大部分在人類(lèi)中都有相應(yīng)的同源基因，如B M P s 、F G F 、A

3、 l k 8 、P i 覷2 a 、D l x 、P a x 9 等多個(gè)基因。另，能譜分析、掃描電鏡比較成年斑馬魚(yú)牙齒與人類(lèi)1 6 周齡胎兒牙胚的礦化程度和C a 、P 比例，發(fā)現(xiàn)兩者相似度極高。在組織和超微結(jié)構(gòu)上，斑馬魚(yú)的牙齒也和人類(lèi)牙齒相似性很高。因此，選擇斑馬魚(yú)作為牙齒發(fā)育研究的模式生物。目前對(duì)于D D ．I 型的相關(guān)致病基因的研究仍然是個(gè)迷，為解決這一難題，本課題組對(duì)一個(gè)河南鄭州的中國(guó)人家系進(jìn)行了相關(guān)基礎(chǔ)研究。利用連鎖分析、全基

4、因組測(cè)序和s a n g e r 測(cè)序等方法證實(shí)V P S 4 B 基因突變導(dǎo)致D D ．I 型疾病，為D D ．I型疾病診斷提供分子學(xué)依據(jù)。通過(guò)對(duì)V P S 4 B 基因的分析，闡述了V P S 4 B 基因突變的致病機(jī)理。在細(xì)胞水平，利用V P S 4 B 過(guò)表達(dá)與s i ．R A N 敲降實(shí)驗(yàn)對(duì)牙齒發(fā)育相關(guān)經(jīng)典通路- W N T 5 A 經(jīng)典通路中的相關(guān)基因的調(diào)控作用進(jìn)行分析，為以后闡明牙齒發(fā)育機(jī)理提供重要的信息。利用斑馬魚(yú)這一模

5、式生物，以斑馬魚(yú)的牙齒發(fā)育系統(tǒng)作為模型，采用“敲低表達(dá)“ 和“過(guò)量表達(dá)”的方法結(jié)合“r e s c u e ”實(shí)驗(yàn)，初步研究了v p s 4 b 基因在斑馬魚(yú)牙齒發(fā)育過(guò)程中的功能作用。材料與方法：1 ．對(duì)一個(gè)中國(guó)河南鄭州的中國(guó)人D D ．I 家系采用連鎖分析，全基因組外顯子測(cè)序、s a n g e r 測(cè)序以及限制性?xún)?nèi)切酶酶切驗(yàn)證等技術(shù)方法，確定致病基因與突變位點(diǎn)。家系樣本D N A 采用酚／氯仿方法提取，R N A 使用T R I Z

6、 O L 與試劑盒提取( R N e a s y M i n iK i t ．Q i a g e n ) ，然后用去g D N A 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒轉(zhuǎn)錄為c D N A 。2 ．使用高分辨率熔煉曲線( H i g h R e s o l u t i o nM e l t i n g ，H R M ) 技術(shù)篩查當(dāng)?shù)厝巳? 0 0 份隨機(jī)樣本，確定V P S 4 B 基因I V S 7 + 4 6 C > G 的突變頻率。3 ． V P