2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  初步探討PI3K/AKT通路在血清刺激宮頸痛HeLa細(xì)胞UBF1磷酸化及核仁轉(zhuǎn)錄中的調(diào)控作用。
  方法:
  通過(guò)Realtime PCR技術(shù)和Western Blot技術(shù)分別檢測(cè)血清刺激和血清饑餓對(duì)細(xì)胞的核仁轉(zhuǎn)錄狀態(tài)及UBF S388磷酸化、PI3K/AKT通路活化的影響;再分別用PI3K抑制劑及AKT抑制劑處理血清刺激的細(xì)胞以阻斷相應(yīng)通路,借助Realtime PCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)

2、和Luciferase Assay技術(shù)觀察PI3K/AKT通路對(duì)血清刺激后的核仁轉(zhuǎn)錄、UBF S388磷酸化、核糖體基因(rDNA)啟動(dòng)子活性的影響;隨后通過(guò)Western Blot實(shí)驗(yàn)和Luciferase Assay實(shí)驗(yàn)來(lái)比較PI3Kα抑制劑、PI3Kβ抑制劑及LY294002對(duì)HeLa細(xì)胞內(nèi)PI3K/AKT通路的阻斷作用、UBF S388磷酸化狀態(tài)及rDNA啟動(dòng)子活性的影響。最后通過(guò)Western Blot技術(shù)和PI染色流式細(xì)胞術(shù)

3、檢測(cè)PI3K通路和Akt通路各自對(duì)下游mTORC1通路活化、周期蛋白cyclinE和cyclinA的蛋白水平及細(xì)胞周期的影響是否存在差異。
  結(jié)果:
  血清饑餓時(shí),Pre-RNA合成量隨著饑餓時(shí)間的延長(zhǎng)而減少。UBF及P-UBF(S388)在饑餓24h時(shí)呈小幅度減少,且后者較前者減少更明顯;超過(guò)24h二者又逐漸增加。AKT總量不變,P-AKT隨時(shí)間減少;血清刺激后Pre-RNA合成量隨著時(shí)間延長(zhǎng)而增加。UBF的總量幾乎無(wú)

4、變化,P-UBF(S388)蛋白量則隨著刺激時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增加。AKT總量不變,P-AKT刺激后快速增加,維持至6h后又減少。
  PI3K抑制劑LY294002處理組和AKT抑制劑處理組中,Pre-RNA合成量隨時(shí)間延長(zhǎng)不斷減少,前者減少得更多。兩種處理組Pre-RNA的減少在12h時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異;AKT總蛋白水平無(wú)明顯變化,P-AKT蛋白在兩種抑制劑作用時(shí)均逐漸減少,直至檢測(cè)不到,且P AKT在LY294002處理組比AK

5、T抑制劑處理組減少得更快;UBF和P-UBF在通路阻斷后均減少,以LY294002處理組更顯著。
  PI3Kα抑制劑處理6h使UBF及P-UBF(S388)在大幅度減少,AKT及P-AKT(S473)亦呈時(shí)間梯度減少;而PI3Kβ抑制劑處理組時(shí)UBF及P UBF(S388)無(wú)明顯減少,但AKT及P-AKT(S473)呈減少趨勢(shì);PI3KⅡ抑制劑、LY294002及AKT抑制劑均使啟動(dòng)子活性減少,以PI3Kα抑制劑組減少得最多,L

6、Y294002次之。AKT抑制劑組分別于PI3Kα抑制劑組、LY294002組進(jìn)行組間比較,P值均小于0.05。PI3Kα抑制劑組與LY294002組比較得P值為0.772。
  阻斷PI3K通路后P-mTOR(S2448)顯著減少,cyclinE蛋白量亦減少但cyclinA并未減少,HeLa細(xì)胞被停滯在S期;但阻斷AKT通路后,P-mTOR(S2448)及周期蛋白cyclinE和cyclinA的蛋白總量均無(wú)明顯變化,細(xì)胞被停滯在

7、G2/M期。
  結(jié)論:
  血清刺激HeLa細(xì)胞使其核仁轉(zhuǎn)錄增加,伴PI3K/AKT通路激活和UBF活化;血清饑餓則呈時(shí)間梯度式抑制核仁轉(zhuǎn)錄、PI3K通路及UBF活化。PI3K/AKT通路,至少通過(guò)促進(jìn)UBFS388磷酸化及提高rDNA啟動(dòng)子活性調(diào)控血清刺激后的核仁轉(zhuǎn)錄;在所有的PI3K激酶亞型中,ⅠA型PI3K在HeLa細(xì)胞中起主要作用。PI3K通路和AKT通路對(duì)血清刺激的UBF磷酸化及核仁轉(zhuǎn)錄的調(diào)控存在差異。血清刺激信

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