化濁解毒方中藥血清對肝星狀細(xì)胞ERK及PI3K-Akt信號通路的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:肝星狀細(xì)胞(HSC)的激活與活化是肝纖維化發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié),細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成與降解失衡是肝纖維化形成的主要病理過程。肝纖維化是由于多種致病因素引起的肝細(xì)胞的損傷及肝組織的炎癥反應(yīng),是各種慢性肝病發(fā)展成為肝硬化的病理基礎(chǔ)。目前臨床尚缺乏特效、無毒副作用的抗肝纖維化藥物,而中醫(yī)藥以整體調(diào)節(jié)為出發(fā)點(diǎn),以辨證論治為指導(dǎo),在抗肝纖維化方面具有獨(dú)特的療效和優(yōu)勢。導(dǎo)師李佃貴教授以“濁毒”理論治療多種原因引發(fā)的肝纖維化,認(rèn)為濁毒內(nèi)蘊(yùn)、肝絡(luò)瘀

2、阻是肝纖維化的基本病機(jī),采用“化濁、解毒、調(diào)肝”為組方原則,制定了化濁解毒方,并取得較好的療效。本實(shí)驗(yàn)采用血清藥理學(xué)方法,從細(xì)胞水平觀察MMP13和TIMP1mRNA、ERK、PI3K及Akt蛋白的表達(dá),探討化濁解毒方大鼠含藥血清對ECM及HSC活化相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用,為化濁解毒方抗肝纖維化可能的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
   方法:選取清潔級雄性SD大鼠40只,體重(200±20)g。自適應(yīng)喂養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為模型對照組(

3、給予生理鹽水)、陽性對照組(即復(fù)方鱉甲軟肝片組)、化濁解毒方組(分為臨床等效劑量和二倍等效劑量),各組等體積灌胃給予相應(yīng)藥物10天后,制備大鼠含藥血清。以含藥血清體外培養(yǎng)肝星狀細(xì)胞并加入TGF-β1,培養(yǎng)48h;其中,每只模型對照組大鼠同時留取備份血清,培養(yǎng)原代的肝星狀細(xì)胞48h,作為正常對照組。應(yīng)用RT-PCR法檢測HSC中MMP13及TIMP1mRNA的表達(dá),Western-blot法檢測p-ERK、PI3K及p-Akt蛋白的表達(dá)。

4、
   結(jié)果:
   1、RT-PCR法檢測HSC中MMP13及TIMP1mRNA的表達(dá):
   1.1、MMP13mRNA的表達(dá):與正常對照組比較,模型對照組、陽性對照組、化濁解毒方臨床等效劑量及二倍等效劑量組中MMP13mRNA的表達(dá)均降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與模型對照組比較,陽性對照組、化濁解毒方二倍劑量組均可促進(jìn)MMP13mRNA的表達(dá),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);化濁解毒方二倍等效

5、劑量的促進(jìn)作用優(yōu)于臨床等效劑量,兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
   1.2、TIMP1mRNA的表達(dá):與正常對照組比較,給予TGFβ-1干預(yù)的各受試組TIMP1mRNA的表達(dá)均升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其余各組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
   2、Western-blot法檢測HSC中p-ERK、PI3K、p-Akt蛋白表達(dá):
   2.1、p-ERK蛋白的表達(dá):與正常對照

6、組比較,模型對照組、陽性對照組、化濁解毒方臨床等效劑量及二倍等效劑量組p-ERK蛋白表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。陽性對照組、化濁解毒方二倍等效劑量組p-ERK蛋白表達(dá)均低于模型對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)?;瘽峤舛痉蕉兜刃┝拷Mp-ERK蛋白表達(dá)低于陽性對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)?;瘽峤舛痉蕉兜刃┝拷Mp-ERK蛋白表達(dá)低于化濁解毒方臨床等效劑量組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

7、   2.2、PI3K蛋白的表達(dá):模型對照組、陽性對照組、化濁解毒方臨床等效劑量及二倍等效劑量組與正常對照組比較,PI3K蛋白表達(dá)均升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與模型對照組比較,化濁解毒方二倍等效劑量組PI3K蛋白表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);化濁解毒方二倍等效劑量與陽性對照組比較PI3K蛋白表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);化濁解毒方二倍等效劑量組PI3K蛋白表達(dá)低于化濁解毒方臨床等效劑量組,差異

8、有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
   2.3、p-Akt蛋白的表達(dá):與正常對照組比較,模型對照組p-Akt蛋白的表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),化濁解毒方二倍等效劑量組p-Akt蛋白的表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);陽性對照組、化濁解毒方臨床等效劑量及二倍等效劑量組p-Akt蛋白表達(dá)均較模型對照組降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其中化濁解毒方二倍等效劑量組差異有顯著性(P<0.01);化濁解毒方二

9、倍等效劑量與臨床等效劑量比較,p-Akt蛋白表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
   結(jié)論:
   1、化濁解毒方含藥血清可通過改善HSC中受抑制的MMP13表達(dá),促進(jìn)ECM降解,進(jìn)而改善ECM的沉積。
   2、化濁解毒方含藥血清可能通過降低HSC中p-ERK、PI3K、p-Akt蛋白的表達(dá),進(jìn)而阻斷ERK及PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,起到減輕HSC活化程度的作用。
   3、化濁解毒方

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