雙載藥納米粒調(diào)控PI3K-Akt信號通路克服腫瘤耐藥性.pdf

1、目的：本課題同時包載化療藥物多西他賽和PI3K/Akt信號通路抑制劑GDC0941，構(gòu)建一種多功能納米粒（聚乳酸乙醇酸-聚乙二醇-七聚精氨酸/聚磺胺二甲氧嘧啶-葉酸納米粒）。評價該多功能納米粒的對腫瘤細胞的抑制作用、對腫瘤細胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)以及對PI3K/Akt信號通路的影響。
　　方法：首先根據(jù)文獻改進方法合成寡聚磺胺二甲氧嘧啶-葉酸（PSD-Folate），以PSD-Folate和實驗室前期合成的PLGA-PEG-R7為材料，采

2、用單因素分析法優(yōu)化了處方后，利用乳化-溶劑蒸發(fā)法制備（DTX+GDC0941）R7/PSD-Fol納米粒。采用透析法測定在不同pH值釋放介質(zhì)中，R7/PSD-Fol納米粒體外釋放特點。采用MTT法和Annexin V/PI雙染法分別考察了R7/PSD-Fol納米粒對MCF-7以及MCF-7/Adr細胞的毒性作用和對凋亡產(chǎn)生的影響。采用Western blotting（蛋白印跡法）考察R7/PSD-Fol納米粒對MCF-7/Adr細胞內(nèi)p

3、-Akt、Caspase家族蛋白表達水平的影響?？疾炝税d多西他賽和GDC0941的R7/PSD-Fol納米粒在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)行為。
　　結(jié)果：制備得到澄清透明并具有淡藍色乳光的納米粒溶液。R7/PSD-Fol納米粒的平均粒徑為（151.8±9.5）nm，Zeta電位為（-31.12±2.14）mV，透射電鏡下觀察，所制備的納米粒呈球形且大小較均一。R7/PSD-Fol納米粒在pH5.0和pH7.4的釋放介質(zhì)中都顯示出明顯的

4、緩釋作用。在各實驗組之間，R7/PSD-Fol納米粒抑制MCF-7細胞和MCF/Adr細胞的半數(shù)抑制率（IC50值）最低，細胞毒性作用最明顯。AnnexinV-FITC雙染實驗結(jié)果表明，(DTX+GDC0941) R7/PSD-Fol納米粒能夠促進MCF-7/Adr的細胞凋亡，且促凋亡作用要明顯高于DTX和GDC0941原藥組。Western blotting實驗結(jié)果顯示，(DTX+GDC0941) R7/PSD-Fol納米粒組處理的M

5、CF-7/Adr細胞內(nèi)p-Akt表達水平最低，Caspase-3、Caspase-8的表達最高，說明(DTX+GDC0941) R7/PSD-Fol納米粒促進了細胞凋亡并有逆轉(zhuǎn)耐藥性的趨勢。藥代動力學(xué)實驗表明(DTX+GDC0941) R7/PSD-Fol納米粒組顯著提高了原藥組的生物利用度。
　　結(jié)論：本課題制備的包載多西他賽和GDC0941的R7/PSD-Fol納米?？梢蕴岣吣Ｐ退幬锏纳锢枚龋⒂心孓D(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性的趨勢。