血小板貯存和處理條件對機采血小板聚集和活化功能影響的研究.pdf

1、目的：
　　 1.探討標準貯存條件下貯存時間對保存期內機采血小板聚集和活化功能的影響。
　　 2.探討濾除白細胞處理對保存期內機采血小板聚集和活化功能的影響。
　　 方法：
　　 實驗Ⅰ.不同貯存時間對機采血小板聚集和活化功能的影響
　　 1.樣品來源:由溫州市中心血站負責隨機提供合格當天機采血小板樣品20份(每樣品容量均約50ml)。
　　 2.樣本的處理:血站采集的血小板樣品均于采集后

2、5h內送達,并立即置于血小板振蕩儀中22℃振蕩保存。然后分別于貯存期第1天、第2天、第3天、第4天和第5天在10000級凈化室內采用無菌操作抽取混勻后血小板懸液各5ml,其中3ml立即用于血小板聚集試驗,另外2ml分離上清用于血漿可溶性P-選擇素檢測。
　　 3.檢測項目及方法:本實驗檢測項目包括血小板聚集試驗和血漿可溶性P-選擇素分析兩部分,其中血小板聚集試驗采用光學法(聚集誘導劑為ADP),血漿可溶性P-選擇素分析采用酶免疫

3、分析法(EIA)。
　　 4.實驗分組:按實驗取樣時距機采血小板采集完成的時間將機采血小板分為5組,依次為第1天組(第0～23h,平均第7.0h)、第2天組(第26～47h,平均第32.2h)、第3天組(第49～71h,平均第61.0h)、第4天組(第74～95h,平均第89.4h)和第5天組(第103～118h,平均第112.6h)。
　　 5.統(tǒng)計學分析:比較上述組間血小板最大聚集率和血漿可溶性P-選擇素的差異,以P

4、＜0.05為有統(tǒng)計學差異。
　　 實驗Ⅱ.濾除白細胞處理對保存期內機采血小板聚集和活化功能的影響
　　 1.樣品來源:由溫州市中心血站負責隨機提供保存時間為第1天(0～24h)和第2天(24～48h)的合格成品各20袋,容量均為250ml左右。
　　 2.樣品處理:在凈化間中用FTS-PL310血小板型白細胞過濾器濾除機采血小板中的白細胞,濾除時流速控制在13～15min/袋。上述保存時間為第1天的機采血小板和保

5、存時間為第2天的機采血小板再各自分為2組(每組10袋):其中一組進行濾除白細胞處理(作為實驗組);另一組不進行濾除白細胞處理(作為對照組)。實驗組過濾前、后各留取5ml樣本1份,對照組相隔13～15 min先后留取5ml樣品各1份,其中3ml用于血小板聚集功能檢測,2ml用于血小板表面P-選擇素表達的檢測分析。
　　 3.檢測項目及方法:本實驗檢測項目包括血小板聚集試驗和血小板表面P-選擇素表達率分析兩部分,其中血小板聚集試驗采

6、用光學法(聚集誘導劑為ADP),血小板表面P-選擇素分析采用流式細胞術。
　　 4.實驗分組:機采血小板按是否進行濾白處理分為實驗組(濾白組)和對照組(非濾白組),上述兩組再按機采血小板的貯存時間再各自分為第1天組和第2天組。
　　 5.統(tǒng)計學分析:分別對實驗組和對照組處理前、后樣品的血小板聚集功能和血小板表面P-選擇素表達率進行統(tǒng)計學分析,以P＜0.05為有統(tǒng)計學差異。
　　 結果：
　　 1.貯存時間

7、對機采血小板聚集和活化功能的影響:隨著貯存時間的延長,保存期內機采血小板的聚集功能降低明顯,第1天組第～5天組的血小板最大聚集率的中位數(shù)(M)、最小值(min)～最大值(max)分別為32.5(11～67)、11.0(4～44)、4.0(2～31)、2.0(1～3)和1.0(0～2);與第1天組比,組間差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。第4天組與第5天組的血小板,致聚劑ADP幾乎已完全喪失對其聚集能力的誘導作用,此時血小板最大聚集率均

8、≤3％。以第1天組血小板最大聚集率100％計,第2天組～第5天組的血小板最大聚集率累積下降率[(x±SD)％]分別為(59.1±15.7)％、(84.6±10.2)％、(94.8±2.3)％和(98.5±1.6)％。隨著貯存時間的延長,機采血小板血漿可溶性P-選擇素濃度有逐漸升高的趨勢,第1天組～第5天組的可溶性P-選擇素濃度[x±SD,ng/ml]分別為9.88±1.60、11.95±1.89、14.56±3.20、17.56±4.0

9、5、21.21±4.54;與第1天組比,組間均有顯著性差異(P＜0.05)。以第1天組P選擇素濃度為基數(shù),第2天組～第5天組的P-選擇素累積上升率[(x±SD)％分別為(24.4±11.4)％,(47.1±18.3)％,(75.5±23.3)％和(114.6±32.1)％。
　　 2.濾白處理對不同貯存時間機采血小板聚集和活化功能的影響:貯存時間為第1天的機采血小板濾白處理前、后血小板最大聚集率的中位數(shù)(M)、最小值(min)～

10、最大值(max)分別為38.5(23～65)、36.5(19～61),兩組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);對照組(非濾白處理組)先后兩次取樣時血小板最大聚集率的中位數(shù)(M)、最小值(min)～最大值(max)分別為34.5(18～59)、33.0(16～55),兩組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);貯存時間為第2天的機采血小板濾白處理前、后最大聚集率的中位數(shù)(M)、最小值(min)～最大值(max)分別為18.0(9～39

11、)、15.5(6～34);兩組間比較差異無統(tǒng)學意義(P＞0.05);對照組(非濾白處理組)先后兩次取樣時血小板最大聚集率的中位數(shù)(M)、最小值(min)～最大值(max)分別為16.5(8～35)、14.5(7～32),兩組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。貯存時間為第1天的機采血小板濾白處理前、后血小板表面P-選擇素的表達率[(x±SD)％]分別為(6.41±2.85)％和(8.34±2.55)％,兩組間比較差異無統(tǒng)計學意義(p

12、＞0.05);對照組(非濾白處理組)先后兩次取樣時血小板表面P-選擇素的表達率[(x±SD)％]分別為(5.74±2.76)％和(6.32±2.46)％,兩組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。貯存時間為第2天的機采血小板濾白處理前、后血小板表面P-選擇素的表達率[(x±SD)％]分別為(6.62±2.11)％和(7.86±2.71)％,兩組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05))。對照組(非濾白處理組)先后兩次取樣血小板表面P-選

13、擇素的表達率[(x±SD)％]分別為(6.06±2.90)％和(6.97±2.83)％,兩組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結論：
　　 1.機采血小板在保存期內存在持續(xù)的保存損傷和體外活化,貯存3天后的機采血小板幾乎已完全喪失對ADP誘導聚集的反應能力,為了減少血小板的保存損傷和保證血小板的輸注療效,應用于臨床的機采血小板貯存期最好不要超過2天。
　　 2.應用血小板專用型白細胞濾器對貯存期在2