基于“痰”致病理論研究橙皮苷對動脈粥樣硬化相關蛋白聚糖的作用.pdf

1、目的:
　　動脈粥樣硬化(AS)是常見心血管疾病的一種，目前已經(jīng)是危險人類健康的重大疾病之一。在AS的發(fā)生發(fā)展過程中，血管平滑肌細胞的增殖和遷移在其中起到重要作用，同時過程中伴隨著一系列的炎癥反應?，F(xiàn)代研究表明AS病變中的脂質(zhì)沉積是繼發(fā)于動脈基質(zhì)的改變之后，細胞外基質(zhì)中蛋白聚糖的堆積導致了脂質(zhì)沉積，進而引起AS病變的形成。中醫(yī)中“痰”理論認為蛋白聚糖病變與“痰”有密切關系，化痰方藥在治療AS中有良好的療效。本研究采用氧化型低密度脂

2、蛋白誘導小鼠血管平滑肌細胞建立AS細胞模型，探討橙皮苷對AS模型血管平滑肌細胞動脈粥樣硬化相關蛋白聚糖表達與脂質(zhì)代謝的影響。
　　方法:
　　實驗采用MTT法測定不同濃度氧化型低密度脂蛋白對血管平滑肌細胞增殖的影響，篩選造模濃度;測定不同濃度橙皮苷對氧化型低密度脂蛋白誘導的血管平滑肌細胞增殖的影響;通過DMMB法檢測橙皮苷對血管平滑肌細胞生成糖胺聚糖的影響;采用Western Blotting法檢測橙皮苷對血管平滑肌細胞bi

3、glycan和decorin蛋白表達的影響;通過油紅0染色法檢測橙皮苷對血管平滑肌細胞脂質(zhì)代謝的影響;Transwell小室遷移實驗檢測橙皮苷對氧化型低密度脂蛋白誘導的血管平滑肌細胞遷移的影響。
　　結果:
　　1、氧化型低密度脂蛋白可以誘導血管平滑肌細胞增殖，50μg/mL的ox-LDL可以誘導AS平滑肌細胞模型成立。與空白對照組比較，在25μg/mL-50μg/mL范圍內(nèi)，血管平滑肌細胞的增殖能力明顯上升(P＜0.01)

4、，說明在這個濃度范圍內(nèi)的ox-LDL對血管平滑肌細胞的增殖有明顯的促進作用。其中，ox-LDL50μg/mL組的促進作用明顯強于ox-LDL25μg/mL組，說明在25μg/mL-50μg/mL范圍內(nèi)，ox-LDL對血管平滑肌細胞的增殖能力有濃度依賴關系。但當ox-LDL濃度在75μg/mL-125μg/mL范圍內(nèi)卻表現(xiàn)出抑制血管平滑肌的作用，而且抑制作用較強。說明ox-LDL在較低濃度時對血管平滑肌細胞的增殖表現(xiàn)為促進作用，當濃度升高

5、是反而會發(fā)揮抑制血管平滑肌細胞增殖的作用。
　　2、橙皮苷在200-250μg/mL濃度范圍內(nèi)對ox-LDL誘導的血管平滑肌細胞的增殖有抑制作用，且濃度越高，抑制作用越明顯。與空白對照組比較，橙皮苷在50-150μg/mL范圍內(nèi)對平滑肌細胞的增殖無明顯作用。說明在此濃度范圍內(nèi)，橙皮苷對血管平滑肌細胞的生長無抑制或促進作用，對其生長無毒性作用。但隨著橙皮苷濃度達到200μg/mL及以上時，橙皮苷對低密度脂蛋白誘導的平滑肌細胞的增殖表

6、現(xiàn)出明顯的抑制作用。
　　3、橙皮苷對血管平滑肌細胞糖胺聚糖表達的影響。結果顯示，與空白對照組比較， ox-LDL組中上清液與細胞層中GAG含量明顯升高(P＜0.01)。與ox-LDL組比較，加入濃度梯度橙皮苷各組上清液與細胞層中GAG含量都有明顯降低(P＜0.01)，且有濃度依賴性。與空白對照組比較，ox-LDL組上清液中GAG在總GAG中的比例明顯上升，說明ox-LDL可明顯促進小鼠血管平滑肌細胞GAG的表達及代謝。與ox-L

7、DL組比較，50μg/mL橙皮苷組作用不明顯，差異無統(tǒng)計學意義。但100μg/mL橙皮苷組、150μg/mL橙皮苷組均可降低由ox-LDL誘導的小鼠血管平滑肌細胞GAG的表達及代謝。但100μg/mL橙皮苷組與150μg/mL橙皮苷組作用強度無顯著差異。
　　4、橙皮苷對平滑肌細胞硫酸軟骨素蛋白聚糖biglycan和decorin表達的影響。結果顯示，與空白對照組比較，ox-LDL組biglycan的表達量明顯升高(P＜0.01)

8、，decorin的表達顯著下降;與ox-LDL組比較，50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL橙皮苷組biglycan的表達量均有所下降(P＜0.01)，decorin的表達量有所上升(P＜0.05)。
　　5、橙皮苷對血管平滑肌細胞脂質(zhì)代謝的影響。結果顯示，與空白對照組比較，ox-LDL組細胞內(nèi)脂質(zhì)明顯增加;與ox-LDL組比較，橙皮苷50μg/mL組細胞內(nèi)脂質(zhì)含量無明顯差異，橙皮苷100μg/mL組細胞內(nèi)脂質(zhì)明顯下降

9、，橙皮苷150μg/mL組細胞內(nèi)脂質(zhì)也顯著降低。
　　6、橙皮苷對氧化型低密度脂蛋白誘導的血管平滑肌細胞遷移的抑制作用。與空白對照組比較，ox-LDL能夠明顯促進血管平滑肌細胞的遷移(P＜0.01)，證實了50μg/mox-LDL可以誘導平滑肌細胞的遷移，細胞模型成立。加入橙皮苷進行干預，結果發(fā)現(xiàn)，與ox-LDL組相比，各個濃度橙皮苷組均可明顯抑制血管平滑肌細胞的遷移(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計學意義。而且，與橙皮苷50μg/mL

10、組比較，橙皮苷100μg/mL組和橙皮苷200μg/mL組的抑制做用要強。說明橙皮苷對血管平滑肌細胞的遷移抑制作用可能存在濃度依賴性。但與橙皮苷100μg/mL組比較，橙皮苷200μg/mL組抑制作用并不明顯(P＞0.05)，無統(tǒng)計學意義?？赡苷f明，橙皮苷對血管平滑肌細胞遷移的抑制作用濃度范圍在50μg/mL-200μg/mL，并在100μg/mL時達到較大程度，在100μg/mL-200μg/mL變化不明顯。
　　結論: