淫羊藿苷的抗動脈粥樣硬化作用及機制研究.pdf

1、目的：通過用維生素D3(VitD3)+高脂飲食造成早期大鼠動脈粥樣硬化(AS)模型，觀察淫羊藿苷的抗AS作用，以及對血脂及細胞間黏附分子-1(ICAM-1)和血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)的影響；通過體外培養(yǎng)主動脈內(nèi)皮細胞，研究淫羊藿苷對炎癥因子TNF—α誘導ICAM-1、VCAM-1表達的影響，以及對TNF—α誘導后Ca2+濃度的影響。 方法：(1)采用一次性注射VitD3后，高脂飲食喂養(yǎng)7周，造成早期大鼠動脈粥樣硬化模

2、型，淫羊藿苷(100mg/kg、200mg/kg)連續(xù)灌胃4周后取血測血脂；取主動脈弓進行組織切片、HE染色；取胸主動脈，一部分進行油紅O染色，觀察淫羊藿苷的抗動脈粥樣硬化作用，另一部分用于制備組織勻漿抽提RNA，Realtime—PCR方法比較ICAM-1和VCAM-1mRNA的表達。(2)分離培養(yǎng)大鼠主動脈內(nèi)皮細胞，運用Ⅷ因子相關抗原免疫細胞化學對細胞進行鑒定。內(nèi)皮細胞經(jīng)TNF—α誘導后，MTT法觀察不同濃度淫羊藿苷處理對細胞增殖的

3、影響，ELISA法檢測細胞表面黏附分子抗原，激光掃描共聚焦顯微系統(tǒng)和Fluo—4/AM熒光探針標記技術測定單細胞游離Ca2+濃度。 結果：(1)至實驗結束時，VitD3+高脂飲食可使大鼠血清總膽固醇(TC：3.7±0.51mmol/L)、低密度脂蛋白(LDL：1.57±0.28mmol/L)明顯升高；兩個淫羊藿苷干預組的TC，LDL明顯降低，TC分別為3.02±0.90mmol/L，2.98±0.21mmol/L；LDL分別為1

4、.04±0.79mmol/L，0.91±0.16mmol/L；而淫羊藿苷處理對于高密度脂蛋白(HDL)沒有顯著影響；甘油三酯(TG)水平各組間差異有顯著性意義，其中模型組最高，而給予高劑量淫羊藿苷組最低。大體標本油紅O染色結果表明，模型組動物血管有散在斑塊；而正常組及兩個給藥組未見明顯斑塊。主動脈組織切片及HE染色結果表明，模型組血管壁出現(xiàn)早期AS病理改變，而兩個給藥組沒有明顯改變。從Realtime—PCR的結果得知，模型組動物血管壁

5、ICAM-1、VCAM-1mRNA表達顯著高于正常組，相對值分別為0.00404±0.00028和0.00861±0.00167，而給予淫羊藿苷干預可使ICAM-1mRNA表達顯著降低(兩個劑量組相對值分別為：0.00291±0.00033和0.00250±0.00018)，對VCAM-1mRNA的表達無顯著影響。(2)結合內(nèi)皮細胞在倒置顯微鏡下的形態(tài)學特征及Ⅷ因子相關抗原鑒定結果，確認分離培養(yǎng)的為血管內(nèi)皮細胞。0.1mg/L、5mg/

6、L、20mg/L的淫羊藿苷處理對細胞增殖無顯著影響。靜息的內(nèi)皮細胞表面只表達少量的ICAM-1和VCAM-1，吸光度(absorption，A)值分別為0.115±0.021、0.085±0.002。經(jīng)炎癥因子TNF—α誘導后，ICAM-1和VCAM-1的表達明顯增強，A值分別為0.452±0.069、0.252±0.025。1mg/L、10mg/L和20mg/L的淫羊藿苷抑制了ICAM-1的表達并呈濃度依賴趨勢，A值分別為0.389±

7、0.022，0.215±0.066和0.149±0.019。而0.1mg/L的淫羊藿苷對ICAM-1的表達無顯著影響。以上四個濃度的淫羊藿苷處理對VCAM-1的表達均無顯著影響。TNF—α可使單細胞游離Ca2+的濃度增高，熒光強度增加(137.681±23.886)，而0.1mg/L、5mg/L和20mg/L的淫羊藿苷處理對單細胞游離Ca2+的濃度增高無顯著影響，熒光強度改變無顯著性差異。 結論：CAMs的表達與AS密切相關，淫