毛花苷C對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的影響.pdf

1、目的：我們前期的研究證實(shí)地高辛顯著影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。同為洋地黃類的毛花苷C被用在對(duì)心力衰竭和心律失常的治療中，然而毛花苷C是否會(huì)影響動(dòng)脈粥樣硬化，缺乏相關(guān)的研究和報(bào)道。本研究的目的是通過ApoE-/-動(dòng)脈粥樣硬化小鼠來研究毛花苷C對(duì)動(dòng)脈粥樣化斑塊形成的影響
　　方法：C57BL/6背景的 ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、低劑量毛花苷C組、高劑量毛花苷C組，每組14只。高脂飼料Western-type diet(WD,含

2、有0.15％膽固醇和21%脂肪)飼養(yǎng)12周。根據(jù)小鼠的體重給予相應(yīng)劑量的毛花苷C干預(yù),其中對(duì)照組腹腔注射相應(yīng)體積的PBS(含有0.1% DMSO)；第二組為低劑量毛花苷C組，腹腔注射（i.p.）毛花苷C約20μg(1mg/kg每天)；第三組為高劑量毛花苷C組，腹腔注射（i.p.）毛花苷C約40μg(2mg/kg每天)。分別在第0天，第30天，第60天，第90天眶靜脈采血收集外周血標(biāo)本測(cè)量脂質(zhì)。在12周結(jié)束的時(shí)候，收集腹腔巨噬細(xì)胞經(jīng)油紅染

3、色分析泡沫細(xì)胞的形成。同一天將所有小鼠用戊巴比妥鈉（50mg/kg）腹腔注射麻醉并進(jìn)行眶靜脈采血，然后行快速頸椎脫臼法安樂死術(shù)處死小鼠。分離主動(dòng)脈、肝臟和血標(biāo)本一起保存在80℃冰箱中待進(jìn)一步分析。主動(dòng)脈大體油紅O染色以及主動(dòng)脈竇油紅O染色，通過對(duì)斑塊面積進(jìn)行定量分析，評(píng)價(jià)毛花苷C對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的影響。檢測(cè)血漿中總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白膽固醇的水平。通過Western blot檢測(cè)主動(dòng)脈標(biāo)本檢測(cè)斑塊處S

4、R-A和CD36蛋白的表達(dá)水平。收集8周齡雄性未處理小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞，加入毛花苷C（10μm）孵育12小時(shí)，沖洗后加入Dil-oxLDL(10μg/ml)孵育4小時(shí)，共聚焦顯微鏡下觀察巨噬細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)的攝取。未處理小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞經(jīng)毛花苷C（10μm）和oxLDL(10μg/ml)處理24小時(shí)后用油紅O染色，觀察巨噬細(xì)胞泡沫化。
　　結(jié)果：毛花苷C劑量依賴性的加劇ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣化斑塊的發(fā)展，毛花苷C處理組的脂質(zhì)水平變