水蓮皂苷抗動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制研究.pdf

1、第一章水蓮總皂苷藥效學(xué)研究。 研究背景:脂質(zhì)異常主要是指血清總膽固醇(TC)或甘油三酯(TG)水平過(guò)高和(或)血清高密度脂蛋白一膽固醇(HDL-C)水平過(guò)低。已有多項(xiàng)臨床試驗(yàn)表明，對(duì)于心血管高危人群，降低膽固醇水平有助于減少心腦血管事件的發(fā)生。血脂調(diào)節(jié)藥是一類可以調(diào)整脂質(zhì)代謝的藥物，能夠降低過(guò)高的血清TC或TG和(或)升高過(guò)低的血清HDL-C，以改善血脂代謝狀況。 現(xiàn)有的調(diào)血脂藥中，合成藥大部分是基于單靶點(diǎn)作用機(jī)制，很難

2、取得滿意療效；而中草藥在降血脂方面的應(yīng)用歷史悠久、資源豐富、效果明顯，具有得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì)，在中醫(yī)的整體理論的指導(dǎo)下，具有多靶點(diǎn)、多成分整體協(xié)同作用的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)。因此把現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的最新成果應(yīng)用于中醫(yī)藥現(xiàn)代化領(lǐng)域，運(yùn)用多靶點(diǎn)理論，從天然藥物或中藥中，開(kāi)發(fā)新型降血脂藥物將有力地推動(dòng)中醫(yī)藥現(xiàn)代化的進(jìn)行。 現(xiàn)代藥理研究表明水蓮皂苷具有明顯的抗應(yīng)激、抗病毒、降血脂、活血、抗炎，抗衰老和抗脂質(zhì)過(guò)氧化等作用。本課題擬按新藥審評(píng)要求，設(shè)計(jì)動(dòng)物模型評(píng)

3、價(jià)水蓮總皂苷調(diào)節(jié)甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)水平的作用，以期為新藥開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用自動(dòng)生化分析儀，測(cè)定水蓮總皂苷干預(yù)后，高血脂大鼠的 TG、TC、HDL-C 以及LDL-C 的含量變化；采用智能血液粘度儀，測(cè)定低、高切變率下的全血粘度(ηb)、血漿粘度(ηp)、血細(xì)胞比容(HCT)、低、高切變率下的全血還原粘度(ηr)、紅細(xì)胞聚集指數(shù)(AI)等指標(biāo)；通過(guò)肉眼觀察主動(dòng)脈弓部粥樣斑塊的分布特點(diǎn)，利用L

4、EICAQ5501W圖像分析儀測(cè)量計(jì)算主動(dòng)脈弓部脂質(zhì)斑塊面積的百分比。 結(jié)果: 1．水蓮總皂苷預(yù)防和治療各三個(gè)劑量組和陽(yáng)性藥物組能明顯降低高血脂大鼠的TG、TC、LDL-C的水平，但對(duì)HDL-C作用不明顯。 2．血液流變學(xué)顯示，水蓮總皂苷能明顯降低高脂血癥大鼠低、高切變率下的全血粘度和全血還原粘度、血細(xì)胞比容；但對(duì)血漿粘度和紅細(xì)胞聚集指數(shù)影響不大。 3．抗動(dòng)脈粥狀硬化顯示，正常對(duì)照組動(dòng)物主動(dòng)脈弓內(nèi)膜未發(fā)現(xiàn)

5、脂質(zhì)斑塊沉積，內(nèi)膜光滑，呈灰白色；模型對(duì)照組動(dòng)物主動(dòng)脈弓內(nèi)膜均病變嚴(yán)重，脂質(zhì)斑塊面積大，多呈乳黃色環(huán)狀隆起；給藥七組動(dòng)物主動(dòng)脈弓內(nèi)膜均未見(jiàn)明顯病變，個(gè)別可見(jiàn)輕微病變，內(nèi)膜稍顯粗糙，偶見(jiàn)淡乳黃色濁顆粒。脂質(zhì)斑塊面積百分比明顯低于模型對(duì)照組。 結(jié)論: 1、水蓮總皂苷能明顯降低高血脂大鼠的TG、TC、LDL-C的水平，明顯降低高脂血癥大鼠低、高切變率下的全血粘度和全血還原粘度、血細(xì)胞比容。 2、倒水蓮總皂苷能明顯降低高

6、脂血癥對(duì)家兔主動(dòng)脈弓的損傷。 第二章水蓮皂苷C對(duì)急性冠脈綜合征患者M(jìn)MP-9及sICAM-1影響的研究。 研究背景:新近研究表明蛋白水解酶(proteolytic enzyme)與急性冠脈綜合征(ACS)的發(fā)生關(guān)系密切，并發(fā)現(xiàn)急性冠脈綜合征患者血漿中基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)的水平明顯增高，與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性有關(guān)；另外，細(xì)胞間粘附分子也與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成及

7、破裂有重要關(guān)系，水蓮皂苷具有明顯的抗炎活性，阻止內(nèi)膜增生等具有內(nèi)皮保護(hù)作用，但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究，能否通過(guò)影響基質(zhì)金屬蛋白酶及粘附分子從而起到穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。 因此，本文就水蓮皂苷對(duì)急性冠脈綜合征患者基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (matrix metalloproteinases-9，MMP-9)、sICAM-1 的影響及意義做了臨床研究。 目的:探討MMP-9，sICAM-1 與急性冠脈綜合征之間的

8、關(guān)系及水蓮皂苷C對(duì)急性冠脈綜合征患者的保護(hù)作用。 方法:將符合急性冠脈綜合征的患者96例，分為急性心肌梗死組(n=46)和不穩(wěn)定型心絞痛組(n=50)，分別觀察服用水蓮皂苷用藥前后MMP-9，sICAM-1 的變化。急性心肌梗死組和不穩(wěn)定型心絞痛組各分為水蓮皂苷C組(A組)和非水蓮皂苷C用藥組(B組)，另設(shè)健康對(duì)照組(C組，n=20)，MMP-9，sICAM-1的檢測(cè)采用夾心酶免疫法。 結(jié)果: 急性冠脈綜合征的患

9、者血清MMP-9，sICAM-1均明顯升高，以急性心肌梗死組升高最明顯，經(jīng)水蓮皂苷C治療后上述兩項(xiàng)指標(biāo)均下降明顯，較非用藥組有明顯下降。 結(jié)論:水蓮皂苷C可降低急性冠脈綜合征患者血清MMP-9，sICAM-1水平。 第三章水蓮皂苷抗炎機(jī)制研究。 研究背景:黃花倒水蓮(Polygala aureocauda Dunn，簡(jiǎn)稱水蓮皂苷)為一民間草藥，系遠(yuǎn)志屬多年生小灌木。主要分布在湖南、福建、廣東、廣西，主要用于高血脂

10、、急慢性肝炎、跌打損傷等疾病的治療。研究表明，其主要的化學(xué)成分是皂苷和口山酮類化合物，水蓮皂苷C為主要的皂苷單體。已有的藥理實(shí)驗(yàn)表明，水蓮總皂苷具有顯著的抗炎活性，但其具體的抗炎成分及抗炎機(jī)制尚不明確。因此，本課題擬深入研究水蓮皂苷單體皂苷C(Reinioside C，RC)的抗炎分子機(jī)制。 方法: 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)研究水蓮皂苷C對(duì)體外培養(yǎng)的單核細(xì)胞中氧化型低密度脂蛋白(oxide-low density lipop

11、rotein，ox-LDL)誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)細(xì)胞間黏附因子-1(solubleintercellular adhesion molecule-1，sICAM-1)等因子的影響；采用高效液相色譜法，測(cè)定了RC對(duì)體外培養(yǎng)的單核細(xì)胞中ox-LDL誘導(dǎo)的非對(duì)稱性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine，ADMA)含量的影響；亦采用高倍顯微鏡觀察法，研究

12、RC對(duì)單核．內(nèi)皮細(xì)胞黏附的影響。采用凝膠顯影法，檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear facor-κB，NF-κB)活性。 結(jié)果:RC 能明顯降低ox-LDL 誘導(dǎo)的單核細(xì)胞中TNF-α含量，此作用呈現(xiàn)一定的濃度依賴性；RC 能明顯降低ox-LDL誘導(dǎo)的單核細(xì)胞中sICAM-1 含量，此作用呈現(xiàn)一定的濃度依賴性；ox-LDL 能誘導(dǎo)單核細(xì)胞釋放ADMA增加，促進(jìn)單核一內(nèi)皮粘附；RC能明顯降低ox-LDL誘導(dǎo)的單核細(xì)胞中ADMA含