條件培養(yǎng)液促CEC增殖及誘導BEPC向CEC分化的研究.pdf

1、目的：
　　探討條件培養(yǎng)液對角膜內(nèi)皮細胞（CEC）的促增殖作用，以及條件培養(yǎng)液誘導骨髓內(nèi)皮祖細胞（BEPC）向CEC分化的可能性，并對比不同條件培養(yǎng)液之間的作用差異，為角膜內(nèi)皮失代償?shù)闹委熖峁┬碌乃悸泛蛯嶒灮A。
　　方法：
　　1、體外分離培養(yǎng)大鼠CEC、BEPC、骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSC）、角膜基質(zhì)細胞（CSC）并制備條件培養(yǎng)液（CM），收集大鼠CSC、BEPC、BMSC條件培養(yǎng)液，根據(jù)條件培養(yǎng)液的來源將實驗為四

2、組（CONTROL、CSC-CM、BEPC-CM、BMSC-CM）分別對CEC進行增殖培養(yǎng)。觀察記錄CEC生長狀態(tài)，通過免疫細胞化學技術(shù)（ICC）及定量聚合酶鏈反應（qPCR）檢測CEC活性相關標志物的表達水平，使用細胞計數(shù)試劑盒（CCK-8）檢測CEC增殖情況，對比不同條件培養(yǎng)液促CEC增殖的作用。
　　2、體外培養(yǎng)大鼠BEPC、CEC、晶狀體上皮細胞（LEC），制備大鼠CEC、LEC、1:1 CEC與LEC條件培養(yǎng)液，實驗分為

3、四組（CONTROL、CEC-CM、LEC-CM、CL-CM）分別對BEPC進行誘導培養(yǎng)。記錄BEPC增殖分化狀態(tài)，通過ICC及qPCR檢測BEPC誘導前后所表達與CEC相關的標志物的水平，并對BEPC的增殖情況進行檢測，對比不同條件培養(yǎng)液對BEPC分化為CEC的誘導作用。
　　結(jié)果：
　　1、不同條件培養(yǎng)液培養(yǎng)5天后的CEC形態(tài)無明顯改變，呈多邊形且分布均勻。Na+/ K+-ATP、AQP1、ZO-1在各組細胞中表達均為陽

4、性，其中Na+/ K+-ATP在CSC-CM中表達水平上升，ZO-1在BMSC-CM中表達水平顯著上升。COL8A1在CSC-CM及BMSC-CM中的表達水平顯著上升。BEPC-CM、CSC-CM、BMSC-CM三種條件培養(yǎng)液都對CEC的增殖起促進作用，其中CSC-CM的促增殖作用最明顯。
　　2、經(jīng)不同條件培養(yǎng)液誘導培養(yǎng)后，各實驗組BEPC細胞分布較均勻，形成細胞接觸抑制，且細胞形態(tài)向類多邊形轉(zhuǎn)化。角膜內(nèi)皮細胞的相關標志物NSE

5、、PAX6、ZO-1、AQP1、COL8A1、VDAC3、CLCN3的表達水平在CEC-CM的誘導下均有不同程度的上升。與LEC-CM和CL-CM相對比，BEPC在CEC-CM誘導下的增殖能力最強。
　　結(jié)論：
　　1、角膜基質(zhì)細胞、骨髓內(nèi)皮祖細胞、骨髓間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)液對角膜內(nèi)皮細胞的增殖均有促進作用，其中角膜基質(zhì)細胞條件培養(yǎng)液的促增值作用最明顯。
　　2、骨髓內(nèi)皮祖細胞在角膜內(nèi)皮細胞、晶狀體上皮細胞條件培養(yǎng)液的