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1、目的:探討小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞(bonemarrowmononuclearcells,BMMNCs)在體外誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的可行性及其方法。 方法:將CCl4肝損傷小鼠的肝臟進(jìn)行培養(yǎng),收集上清,添加到培養(yǎng)液中誘導(dǎo)BMMNCs分化。倒置顯微鏡連續(xù)觀察細(xì)胞分化過(guò)程的形態(tài)學(xué)變化。培養(yǎng)1,7,14,21天時(shí),逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)各組細(xì)胞甲胎蛋白(AFP)、細(xì)胞角蛋白18(CK18)、細(xì)胞角蛋白19(CK19)、肝細(xì)胞核因
2、子3β(HNF3β)、酪胺酸胺基轉(zhuǎn)移酶(rAT)和白蛋白(ALB)基因的表達(dá),免疫熒光反應(yīng)檢測(cè)AFP、CK18、CK19、ALB蛋白水平的表達(dá);高碘酸—希夫反應(yīng)(PAS反應(yīng))檢測(cè)細(xì)胞糖原合成。 結(jié)果:誘導(dǎo)組細(xì)胞出現(xiàn)肝細(xì)胞樣形態(tài)變化;培養(yǎng)第7天出現(xiàn)AFP、CK19基因表達(dá),其中AFP第14天表達(dá)增強(qiáng),第21天表達(dá)減弱;第14天開始出現(xiàn)ALB、CK18、HNF3β基因表達(dá),而后持續(xù)表達(dá)到21天;第21天出現(xiàn)TAT表達(dá)。免疫熒光反應(yīng)表
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