Trolox在肌萎縮側(cè)索硬化癥中的神經(jīng)保護(hù)作用及氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與自噬的相關(guān)研究.pdf

1、 2A dissertation submitted to Zhengzhou University for the degree of Doctor The Neuroprotection of Trolox in the Organotypic Slice Cultues of ALS and the Mechanisms of Oxidative Stress, ER Stress and Autophag

2、y By : Peiqi Lu Supervisor: Prof. Jiyu Lou Neurology The Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University May, 2015 4脊髓薄片培養(yǎng)。對(duì)薄片進(jìn)行氧化應(yīng)激損傷后，在鏡下觀察不同程度的損傷對(duì)野生型和突變型小鼠的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元形態(tài)和數(shù)目有何變化。這里采用胎鼠運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的培養(yǎng)方法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，造成氧化損傷后，檢測(cè)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元內(nèi)活性氧簇

3、的含量；其細(xì)胞毒性通過檢測(cè)培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶（LDH）釋放量來反映。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)提示 Trolox 在一定程度上保護(hù)原代培養(yǎng)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元免受過氧化氫造成的氧化應(yīng)激損傷。突變型給予運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元 Trolox 處理后，顯著地減少了胞內(nèi)活性氧簇的產(chǎn)生。 然而，對(duì)于野生型的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，Trolox 并未表現(xiàn)出明顯的抗氧化作用。 結(jié)論： 在培養(yǎng)的 SOD1 突變型小鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中， Trolox 顯著的降低了ROS 水平，降低了氧化應(yīng)激帶來的損

4、傷，提示具有保護(hù)作用。 第二部分 肌萎縮側(cè)索硬化中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)伴隨著 NF-κB 的活化 目的：本研究目的是探討肌萎縮側(cè)索硬化中可能的機(jī)制之一——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)及其通路。 方法：為了檢測(cè)野生型和突變型中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)和 NF-κB 是否參與了發(fā)病過程，給予內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑后分別對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白和 NF-κB 進(jìn)行免疫印跡檢測(cè)，并對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路中的關(guān)鍵分子進(jìn)行檢測(cè)，來探討可能的通路。用免疫熒光直觀的觀察外源性蛋白的分布特點(diǎn)。 結(jié)果

5、：肌萎縮側(cè)索硬化時(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)參與了發(fā)病過程，同時(shí)檢測(cè)到NF-κB 的活化。 第三部分 肌萎縮側(cè)索硬化中 SOD1 突變型小鼠模型培養(yǎng)中海藻糖對(duì)自噬的活化和神經(jīng)保護(hù)作用 目的：本研究中，我們采用海藻糖誘導(dǎo) ALS 動(dòng)物模型中自噬的高表達(dá)，觀察海藻糖對(duì)各種造成 ALS 蛋白質(zhì)沉積的毒性蛋白的作用。 方法：對(duì) ALS 小鼠脊髓進(jìn)行切片及固定，采用不同濃度的海藻糖誘導(dǎo)自噬的發(fā)生。用免疫印跡法檢測(cè) LC3-Ⅱ這種經(jīng)典的自噬標(biāo)志物，以及另一種