乳腺癌SLN分子病理檢測技術(shù)及腋窩轉(zhuǎn)移標(biāo)志物的研究.pdf

1、研究背景：
　　SLN是原發(fā)腫瘤發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移所必經(jīng)的第一站淋巴結(jié)。乳腺癌SLNB能準(zhǔn)確預(yù)測腋窩NSLN的狀態(tài)。當(dāng)SLNB結(jié)果為陰性時，患者不需行ALND?，F(xiàn)有的術(shù)中冰凍切片假陰性率高，而通過分子生物學(xué)方法檢測乳腺上皮特異基因的表達(dá)來判斷SLN中是否有乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移則具有整體、客觀、準(zhǔn)確和快速等優(yōu)勢。本課題組前期建立了乳腺癌SLN分子病理檢測技術(shù)，能夠在術(shù)中快速識別SLN狀態(tài)，為乳腺外科醫(yī)師進(jìn)行下一步手術(shù)策略提供幫助，不過其敏感

2、性及特異性有待進(jìn)一步大樣本驗(yàn)證。
　　對于SLNB陽性的患者，通常需要行ALND，來控制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。但其中約40～70％患者腋窩NSLN并沒有轉(zhuǎn)移，對這部分乳腺癌患者不必要行ALND，還可以避免其所帶來的一系列術(shù)后并發(fā)癥。因此辨別何種SLN陽性乳腺癌有很低的腋窩轉(zhuǎn)移風(fēng)險而不需行ALND是非常有必要的。不過現(xiàn)有的預(yù)測模型及分子標(biāo)志物仍比較局限并且其實(shí)用價值有待于進(jìn)一步的研究，本研究通過對乳腺癌陽性SLN進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，探索預(yù)測N

3、SLN轉(zhuǎn)移狀態(tài)的分子標(biāo)志物，也許能使一些陽性SLN乳腺癌患者免于行ALND。
　　目的：
　　驗(yàn)證本課題組前期建立的乳腺癌SLN術(shù)中快速分子病理檢測技術(shù)的可靠性。通過轉(zhuǎn)錄組分析，全面的探索和尋找能夠預(yù)測乳腺癌SLN陽性患者腋窩轉(zhuǎn)移狀態(tài)的分子標(biāo)志物。
　　方法：
　　本研究入組的所有病例符合以下標(biāo)準(zhǔn):①術(shù)前病理學(xué)證實(shí)為乳腺癌;②臨床及影像學(xué)檢查提示腋窩淋巴結(jié)陰性;③腫瘤細(xì)胞無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;④術(shù)前未進(jìn)行過化療、內(nèi)分泌治療

4、及放療。
　　收集北京市7家三甲醫(yī)院的134例乳腺癌SLN樣本，分別應(yīng)用RT-LAMP法和經(jīng)過美國FDA批準(zhǔn)的GeneSearch技術(shù)檢測乳腺癌患者的SLN，對比兩種檢測方法的一致性。
　　收集解放軍307醫(yī)院2010年11月至2013年4月SLNB陽性伴或者不伴腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，應(yīng)用第二代高通量Illumina Hiseq2000基因組平臺測序分析陽性SLN中腫瘤細(xì)胞的差異表達(dá)基因和融合基因。
　　結(jié)果：

5、　　以GeneSearch技術(shù)為金標(biāo)準(zhǔn)，RT-LAMP方法的敏感性為96.2％(25/26)，特異性為96.3％(104/108)，兩種方法的一致率為96.3％(129/134)，統(tǒng)計學(xué)一致性分析Kappa=0.8857，P＜0.001。
　　從305例乳腺癌患者中篩選出SLN陽性的患者6例（所有患者ER/PR+，HER2-，Ki67＜20％），平均劃分為NSLN陰性組和陽性組。在NSLN陽性組和陰性組分別發(fā)現(xiàn)103和47個差異表

6、達(dá)基因。其中，F(xiàn)ABP1（陽性組）和CYP2A13（陰性組）是唯一的兩個編碼蛋白并且表達(dá)水平較高的基因。與此同時，在FDR＜0.05的水平下，NSLN陽性組發(fā)現(xiàn)了62個上調(diào)基因（主要富集在KLK基因家族）和98個下調(diào)基因（主要富集在B細(xì)胞信號受體通路上）。另外還發(fā)現(xiàn)了10個不同的融合基因，在NSLN陽性組中最頻繁發(fā)生融合的基因?yàn)镮GLL5，預(yù)示著在淋巴轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用。
　　結(jié)論：
　　本課題組前期建立的RT-LAM