蛋白酶體激活因子REGγ對糖原合成酶激酶GSK3B蛋白活性及降解機(jī)制的研究.pdf

1、糖原合成酶激酶(Glycose sythase kinase3，GSK3)，是最初在糖原合成中發(fā)現(xiàn)的一個重要的絲氨酸/蘇氨酸激酶，在細(xì)胞各種信號通路包括WNT通路，胰島素敏感性調(diào)節(jié)，造血干細(xì)胞，細(xì)胞周期和凋亡，腫瘤細(xì)胞的存活中都扮演著重要的角色。GSK3具有兩個由不同基因編碼翻譯的剪切體：GSK3α(51KD)和GSK3β(47kD)。11S調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物γ亞單位REGγ(11S regulator complex gammasubun

2、it)，是一類蛋白酶體激活因子，它能與20s蛋白酶體結(jié)合而參與泛素與ATP非依賴的蛋白降解。本文研究了蛋白酶體激活因子REGγ與糖原合成酶激酶GSK3β之間的相互作用。
　　 首先，我們發(fā)現(xiàn)蛋白酶體激活因子REGγ能結(jié)合并降解糖原合成酶激酶GSK3β。過量表達(dá)REGγ會增加GSK3β降解，敲低REGγ會增加內(nèi)源GSK3β蛋白水平。REGγ基因敲除小鼠MEF細(xì)胞內(nèi)GSK3β蛋白水平也會增加。另外，REGγ能影響GSK3β蛋白在細(xì)胞

3、內(nèi)的定位。同時我們探究了REGγ降解GSK3β的機(jī)制。
　　 然后，我們探究了REGγ與GSK3β之間的作用，所引起的細(xì)胞內(nèi)生物學(xué)功能的變化。在REGγ敲低的細(xì)胞內(nèi)，我們發(fā)現(xiàn)GSK3β蛋白水平上升，腫瘤抑制因子P53的Ser315位磷酸化修飾升高。已有報道表明GSK3β能磷酸化修飾p53的Ser315，而p53的Ser315磷酸化修飾能促進(jìn)p53的轉(zhuǎn)錄活性，增加p53的泛素化降解。因此，REGγ可能通過GSK3β，間接參與P53

4、的磷酸化修飾、轉(zhuǎn)錄活性及降解調(diào)控。同時我們發(fā)現(xiàn)GSK3β下游蛋白β-catenin蛋白水平降低。REGγ也有可能通過GSK3β間接調(diào)節(jié)β-catenin，從而調(diào)控β-catenin參與的腫瘤相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。流式細(xì)胞儀FACS技術(shù)檢測細(xì)胞周期和凋亡實驗時，發(fā)現(xiàn)過量表達(dá)REGγ會抑制GSK3β誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　 綜上所述我們主要研究了REGγ能結(jié)合并降解GSK3β蛋白，從而影響GSK3β下游蛋白的活性，生物功能和與之相關(guān)的腫瘤發(fā)