中國常用農(nóng)藥對蛋白酶體和線粒體的影響.pdf

1、帕金森病(Parkinson’s Disease，PD)是目前常見的老年性神經(jīng)退行性疾病，在中國65歲以上人群中發(fā)病率超過1％[1]。流行病學(xué)研究表明農(nóng)藥接觸，飲用井水，農(nóng)業(yè)耕作等均有可能增加PD發(fā)病的風(fēng)險[2]。而農(nóng)藥很可能通過引起蛋白酶體功能紊亂，線粒體損傷以及與遺傳因素相互作用等幾個方面促進(jìn)了PD的病理進(jìn)程。中國是世界第一農(nóng)藥生產(chǎn)和使用大國，了解我國農(nóng)藥的作用機(jī)制對闡明帕金森的發(fā)病機(jī)理以及更好的預(yù)防和治療帕金森病具有十分重要的意義

2、。
　　 第一章檢測中國常用農(nóng)藥對蛋白酶體和線粒體的影響
　　 目的：檢測中國常用農(nóng)藥對蛋白酶體活性和線粒體形態(tài)學(xué)的影響。
　　 方法：構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)pEGFP-CL1(GFP-CL1)的人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤(SH-SY5Y)細(xì)胞系，并以此為模型檢測蛋白酶體活性。與GFP融合表達(dá)的CL1是一個含有16個氨基酸(ACKNWFSSLSHFVIHL)的肽段，由蛋白酶體降解[3]。Western Blot檢測GFP-CL1表達(dá)

3、量的變化即反映農(nóng)藥對蛋白酶體的影響。通過對線粒體標(biāo)志蛋白(TOM20)進(jìn)行免疫熒光染色，觀察各種農(nóng)藥對HeLa細(xì)胞線粒體形態(tài)的影響。
　　 結(jié)果：農(nóng)藥包括百草枯、魚藤酮、毒死蜱、硫丹、氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、二甲戊二靈、吡螨胺和唑螨酯，可以引起GFP-CL1表達(dá)量增加，蛋白酶體活性降低。農(nóng)藥可以導(dǎo)致線粒體不同程度和不同形式的改變。
　　 結(jié)論：農(nóng)藥導(dǎo)致蛋白酶體活性降低和線粒體形態(tài)改變可能是PD發(fā)病的潛在機(jī)制。
　　

4、 第二章 PD相關(guān)基因SH-SY5Y細(xì)胞模型的構(gòu)建
　　 目的：建立穩(wěn)定表達(dá)各種PD相關(guān)基因和病理性突變體的SH-SY5Y細(xì)胞模型。
　　 方法：通過G418篩選，建立了穩(wěn)定表達(dá)各種PD相關(guān)基因和病理性突變體的SH-SY5Y細(xì)胞模型，包括Parkin野生型及其 T240R突變體；PINK1野生型及其G309D突變體；LRRK2野生型和DJ-1野生型穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系及自噬水平相關(guān)蛋白LC3穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。
　　 結(jié)果