血清腺苷酸酶活性與癲癇發(fā)作的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景與現(xiàn)狀：
　　癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)較為常見且容易反復發(fā)作的疾病，癲癇致殘率高、病程長，全世界癲癇患者數(shù)以千萬，中國作為人口大國，癲癇患者有900多萬，癲癇反復發(fā)作給患者及家庭造成極大的心理負擔和經(jīng)濟負擔。癲癇是以腦神經(jīng)元過度放電所致的暫時性中樞神經(jīng)功能紊亂為基本特征的腦組織慢性疾病，發(fā)作性、短暫性、重復性以及刻板性是其臨床四大特點。近期，許多學者對癲癇病因、發(fā)病機制及病理學改變和治療方法進行了研究并取得了較大進展。目前普遍認為，

2、癲癇發(fā)生與突觸重塑、神經(jīng)遞質(zhì)受體、神經(jīng)膠質(zhì)細胞、離子通道、遺傳因素、苔蘚纖維發(fā)芽等多方面密切相關(guān)，癇性放電的開始伴有離子異常跨膜運動，通過突觸聯(lián)系和易化使放電逐漸傳播，最終通過主動抑制和負反饋來終止癇性放電。但癲癇發(fā)作的的具體機制尚未明了，每次癲癇發(fā)作開始和終止的具體機制也未闡明。許多難治性癲癇患者應(yīng)用多種抗癲癇藥物并無顯著效果，說明仍然需要尋找新的藥理學作用靶點。因此，研究癲癇的發(fā)病機制、研究新的藥理學作用靶點，對改善癲癇患者的預后及

3、降低死亡率有重要的臨床意義。
　　許多相關(guān)研究表明，腺苷系統(tǒng)是腦組織中重要的抗癲癇和腦保護系統(tǒng)。其通過腺苷與G蛋白偶聯(lián)腺苷受體相互作用來抑制腦組織內(nèi)的神經(jīng)元活性，急性癲癇發(fā)作后腺苷水平顯著升高，隨后發(fā)作終止，腺苷系統(tǒng)被稱為“內(nèi)源性抗癲癇系統(tǒng)”，可溶性核苷酸酶可與胞外核苷酸酶協(xié)同作用產(chǎn)生腺苷而在癇性發(fā)作中起著重要的調(diào)節(jié)作用。目前腺苷酸酶活性與癲癇的關(guān)系已引起廣大醫(yī)學工作者的重視。
　　目前，癲癇發(fā)作后，患者血清ATP、ADP及

4、AMP水解率改變以及血清可溶性磷酸二酯酶活性變化的相關(guān)報道較少；不同癲癇發(fā)作類型的血清ATP、ADP及 AMP水解率改變以及血清可溶性磷酸二酯酶活性變化的是否相同未見有報道；腺苷A1R與模型海馬神經(jīng)元損傷的關(guān)系方面的研究也較少。本文主要采用前瞻性研究納入癲癇患者65例（全面性發(fā)作33例，部分性發(fā)作32例）和正常健康對照者35例，從第一部分和第二部分兩個部分分別探討了不同癲癇發(fā)作類型發(fā)作前后不同時間點血清ATP、ADP及AMP水解情況，不

5、同癲癇發(fā)作類型發(fā)作前后不同時間點血清可溶性磷酸二酯酶活性變化情況，以了解腺苷酸酶活性與癲癇發(fā)作的關(guān)系以及不同癲癇發(fā)作類型腺苷酸酶活性有無差異，進一步探討腺苷酸酶活性在癲癇發(fā)作過程中的作用機制，并深入了解不同癲癇發(fā)作類型對腺苷酸酶活性的敏感性，為臨床選藥提供依據(jù)；第三部分通過建立杏仁核點燃癲癇大鼠模型，從而對點燃癲癇大鼠各個時間段海馬神經(jīng)元的病理組織學和凋亡的影響進行分析，探討腺苷A1R與模型海馬神經(jīng)元損傷的關(guān)系，了解其對腦神經(jīng)的保護作用

6、，從而能更深刻的理解腺苷A1R與癲癇間的關(guān)系，為癲癇的治療提供參考。
　　第一部分不同癲癇發(fā)作類型發(fā)作間期和癲癇發(fā)作后血清ATP、ADP和AMP水解率的動態(tài)變化
　　目的：
　　探討患者發(fā)作間期和發(fā)作后血清ATP、ADP和AMP水解率的變化，分析ATP、ADP和AMP水解率與癲癇發(fā)作的關(guān)系，并分析不同癲癇發(fā)作類型癲癇發(fā)作后ATP、ADP和AMP水解率有無差異。
　　方法：
　　1．研究對象：收集2014年3

7、月至2015年12月在我院神經(jīng)內(nèi)科治療的癲癇患者65例，納入病例組（全面性發(fā)作組33例，復雜部分性發(fā)作組32例）。病例組另外收集同期在我院門診進行常規(guī)體檢的正常人員35例作為健康對照組。
　　2．觀測指標：采用紫外線吸收分光光度法，觀察病例組癲癇發(fā)作后5、10、20、30、60 min和10 h時的ATP、ADP和AMP水解率變化情況，與健康對照組比較；觀察全面性發(fā)作組和復雜部分性發(fā)作組癲癇發(fā)作后5、10、20、30、60 min

8、和10 h時的ATP、ADP和AMP水解率變化情況，并進行比較。
　　3．統(tǒng)計學方法：采用SPSS21.0版本統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，ATP或ADP或AMP水解率以（x±s)描述，采用重復測量數(shù)據(jù)的方差分析，組間比較采用t檢驗。
　　結(jié)果：
　　1．病例組患者在發(fā)作間期ATP水解率、ADP水解率、AMP水解率與對照組比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)；
　　2．發(fā)作后5min時ATP水解率、ADP水解率、AMP水解

9、率均明顯升高，其中ATP水解率在發(fā)作后20 min達峰值，之后逐漸下降，至發(fā)作后10 h恢復至發(fā)作間期水平；ADP水解率、AMP水解率在發(fā)作后5 min達峰值，隨后逐漸下降，至發(fā)作后60 min即恢復至發(fā)作間期水平(P<0.05)。
　　3．病例組發(fā)作后5min時患者血清ATP水解率、ADP水解率、AMP水解率均明顯升高，病例組患者ATP水解率與對照組相比在發(fā)作后20 min達峰值，之后逐漸下降，至發(fā)作后10 h恢復至發(fā)作間期水平

10、；ADP水解率、AMP水解率在發(fā)作后5 min達峰值，隨后逐漸下降，至發(fā)作后60 min即恢復至發(fā)作間期水平(P<0.05)。
　　4．全面性發(fā)作組和部分性發(fā)作組相比，癲癇發(fā)作后5min，20 min血清ATP水解率、ADP水解率、AMP水解率升高更為顯著(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　癲癇發(fā)作后腺苷酸水解率明顯升高，全面性發(fā)作患者與部分性發(fā)作患者相比，腺苷酸水解率升高的更為明顯，提示腺苷酸酶活性增高可能參與了與癲

11、癇發(fā)作終止相關(guān)的調(diào)節(jié)機制。
　　第二部分不同癲癇發(fā)作類型血清可溶性磷酸二酯酶活性與癲癇發(fā)作的關(guān)系
　　目的：
　　探討不同癲癇類型患者發(fā)作后血清可溶性磷酸二酯酶活性的變化情況，了解可溶性磷酸二酯酶活性在癲癇發(fā)作中的作用。
　　方法：
　　1．研究對象：收集2014年3月至2015年12月在我院神經(jīng)內(nèi)科治療的癲癇患者65例，納入病例組（全面性發(fā)作組33例，復雜部分性發(fā)作組32例）。同時收集常規(guī)體檢的正常人員3

12、5例作為健康對照組。
　　2．觀測指標：采用紫外線吸收分光光度法，觀察病例組患者發(fā)作后5min、10 min、20min和10 h時磷酸二酯酶水平、乳酸脫氫酶(LDH)水平變化情況并與正常對照組比較。觀察全面性發(fā)作組和復雜部分性發(fā)作組癲癇發(fā)作后5min、10 min、20min和10 h時磷酸二酯酶水平、乳酸脫氫酶(LDH)水平變化，并進行比較。
　　3．統(tǒng)計學方法：采用SPSS21.0版本統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，磷酸二酯酶

13、活性、LDH以（x±s)描述，采用重復測量數(shù)據(jù)的方差分析，組間比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1．病例組患者在發(fā)作間期磷酸二酯酶活性與對照組比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　2．病例組患者在發(fā)作后5min、10 min、20min時磷酸二酯酶活性明顯升高，在發(fā)作后20 min時達峰值，之后逐漸下降，至發(fā)作后10 h恢復至發(fā)作間期水平(P<0.05)；
　　3．全面性發(fā)作患

14、者和部分性發(fā)作患者相比，發(fā)作后5min、10 min、20min時磷酸二酯酶活性明顯升高，在發(fā)作后20 min時達峰值，之后逐漸下降，至發(fā)作后10 h恢復至發(fā)作間期水平(P<0.05)；
　　4．LDH活性在發(fā)作間期、發(fā)作后不同時間點的變化均無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　癲癇發(fā)作后磷酸二酯酶活性明顯升高，全面性發(fā)作后磷酸二酯酶活性升高更為明顯，磷酸二酯酶活性增高與ATP水解率密切相關(guān)，也進一步證明了癲

15、癇發(fā)作后腺苷酸活性明顯升高，這可能是癲癇發(fā)作終止的一個調(diào)節(jié)機制；全面性發(fā)作后磷酸二酯酶活性增高升高更為明顯，證實腺苷酸活性對全面性發(fā)作的調(diào)節(jié)作用更強。
　　第三部分腺苷A1受體對杏仁核點燃癲癇大鼠海馬神經(jīng)元損傷作用機制
　　目的：
　　探討腺苷A1受體活性對點燃癲癇大鼠海馬神經(jīng)元損傷的作用，為癲癇發(fā)作的治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1．研究對象：選擇84只SPF級雄性Wistar大鼠，根據(jù)隨機數(shù)字表法

16、將動物分為正常組、致癇組、致癇+腺苷A1R拮抗劑(8-環(huán)戊-1，3-二丙基黃嘌呤，DPCPX)組、致癇+腺苷A1R激動劑(2-氯化腺苷，2-CADO)4個分組，每組21只。致癇組、致癇+ DPCPX組、致癇+2-CADO組采用電刺激點燃癲癇模型。正常組未進行手術(shù)和電刺激致癇等處理；致癇組癲癇模型建立成功前后未注射任何藥物；致癇+DPCPX組大鼠癲癇模型建立成功前1h和成功后1 h尾部靜脈注射0.3mg/kg DPCPX；致癇+2-CAD

17、O組大鼠癲癇模型成功前1h和成功后1 h尾部靜脈注射0.6mg/kg2-CADO。
　　2．觀測指標：采用TUNEL法，觀察各組在癲癇模型建立成功后1天、15天、30天時的海馬CA3區(qū)組織學病理變化及神經(jīng)元凋亡指數(shù)(AI)變化情況。
　　3．統(tǒng)計學方法：符合正態(tài)分布數(shù)據(jù)用(x±s)描述，采用t檢驗，以P<0.05為差異有顯著性，統(tǒng)計學軟件選用SPSS21.0版本。
　　結(jié)果：
　　1．致癇組、致癇+DPCPX組、

18、致癇+2-CADO組動物在點燃癲癇后1天、15天、30天均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)元細胞排列松散無規(guī)則，輪廓模糊，邊緣欠清晰，胞核萎縮，胞漿空泡等神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損害；
　　2．相同時間點，致癇+DPCPX組的神經(jīng)元結(jié)構(gòu)損害程度較致癇組加重，致癇+2-CADO組較致癇組減輕。正常組在不同時間點的AI變化不明顯(P＞0.05)，致癇組、致癇+DPCPX組、致癇+2-CADO組的AI隨著癲癇發(fā)作時間的延長，AI逐漸增加(P<0.05)；
　

19、　3．在相同時間點，致癇組、致癇+DPCPX組、致癇+2-CADO組的AI均明顯高于正常組(P<0.05)，致癇+DPCPX組的AI均明顯高于致癇組(P<0.05)；致癇+2-CADO組的AI明顯低于致癇組和致癇+DPCPX組(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　癲癇發(fā)作會引起神經(jīng)元損傷和凋亡，腺苷 A1R活性降低，神經(jīng)元損傷和凋亡更為明顯，這可能是癲癇發(fā)作后神經(jīng)元損傷的機制之一；通過增加腺苷 A1R活性可保護神經(jīng)元，降低其損