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文檔簡介
1、家蠶繭脫膠后可以獲得一種生物相容性良好的高分子蛋白纖維—絲素。這種絲素纖維可溶解在高濃度的中性鹽如氯化鈣和乙醇水溶液三元系統(tǒng)中,經(jīng)過透析脫鹽處理后可獲得水溶性的再生液態(tài)絲素。改變蠶絲脫膠和絲素溶解的條件就可以制成分子量范圍分布不同的絲素肽混合物(10~200kDa)。當將這種再生液態(tài)絲素迅速引入到能與水混溶的極性有機溶劑如甲醇、乙醇或丙酮中,絲素蛋白因快速失水、變性而引起其結(jié)構(gòu)β化,就生成乳白色的絲素微粒。經(jīng)過有機溶劑的分離就可以制成粒
2、徑分布在40~120 nm范圍內(nèi)絲素納米顆粒。這種結(jié)晶性的絲素納米顆粒不溶于水,但經(jīng)過超聲處理能良好分散在水溶液中。應(yīng)用戊二醛為交聯(lián)劑,通過絲素納米顆粒表面存在的ε-氨基將治療糖尿病的常用多肽藥物-胰島素固定在絲素納米顆粒表面,制成固定化胰島素的絲素納米顆粒或稱之為胰島素-絲素納米顆粒生物結(jié)合物(簡稱Ins-SFNs)。本實驗應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)對Ins-SFNs生物結(jié)合物的體外特性作了系統(tǒng)分析,探討了這種生物結(jié)合物的最佳
3、制備工藝或條件。當戊二醛濃度為0.7%、絲素納米顆粒與多肽藥物之比為15:30(mg/IU)情況下,4℃交聯(lián)8h可獲得較好的最佳修飾效果,其回收率可達到90~120%。當胰島素與絲素納米顆粒表面氨基共價結(jié)合后,其生物結(jié)合物的熱穩(wěn)定性以及對胰蛋白酶消化的抵抗力都有較大提高;Ins-SFNs在血清中的體外半衰期也明顯高于自然胰島素(2.5倍)。對流免疫電泳分析表明Ins-SFNs在兔體內(nèi)無免疫原性。體內(nèi)活性試驗表明,Ins-SFNs在四氧嘧
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