母代大鼠高脂飲食對子代早期肝臟脂代謝及其相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、胎源性成人疾病（Fetal Origins adult disease，F(xiàn)OAD）與健康和疾病的發(fā)育起源學(xué)說（Developmental Origins of Health and Disease Hypothesis，DOHaD）都強(qiáng)調(diào)母親孕期營養(yǎng)對子代生長發(fā)育至關(guān)重要。早年研究發(fā)現(xiàn)孕期營養(yǎng)不良可增加子代成年后罹患代謝性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。近年，隨著肥胖，特別是兒童肥胖患病率的迅速增加，母親孕期高脂高營養(yǎng)狀態(tài)對子代代謝性疾病發(fā)生的影響也逐漸引

2、起重視。本課題旨在探索母代大鼠穩(wěn)定高脂飲食對子代早期肝臟脂肪變、脂代謝的影響，及其可能機(jī)制。
　　第一部分：母代大鼠高脂飲食對子代早期肝臟脂代謝的影響
　　目的：通過母鼠孕期與哺乳期高脂飲食，觀察母代高脂飲食對子代早期生化指標(biāo)及肝臟病理改變的影響。
　　方法：SD雌性大鼠隨機(jī)分成高脂飲食組（HF-F0組）和對照組（CON-F0組），至交配懷孕產(chǎn)仔，哺乳期母鼠繼續(xù)原飲食并喂養(yǎng)子鼠至其3周齡斷乳，取肝臟組織觀察肝臟病理變化

3、，同時(shí)心臟采血檢測相關(guān)代謝指標(biāo)。
　　結(jié)果：HF-F1組子鼠平均出生體重低于CON-F1組（P=0.027），而至PND7和斷乳PND21時(shí)體重均明顯高于CON-F1組子鼠（P值均為1.00E-04）；PND21時(shí)HF-F1組糖耐量曲線下面積（AUC）、血清總CHO與TG水平、肝臟內(nèi)TG含量均高于CON-F1組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值分別為3.00E-04、0.025、0.031和0.01）。HF-F1組子鼠于PND1和PND7時(shí)

4、即可見肝細(xì)胞彌漫小泡性變性，至PND21時(shí)肝細(xì)胞呈現(xiàn)彌漫性空泡變性，部分區(qū)域以大泡性變性為主。
　　結(jié)論：母鼠孕期持續(xù)至哺乳期的高脂飲食可引起幼年期子代糖耐量減退、高脂血癥及肝臟脂肪變性等改變。
　　第二部分：母代高脂飲食對幼年期子代肝臟脂肪酸代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　目的：觀察脂肪酸代謝相關(guān)基因在母代高脂飲食下幼年子代肝臟中的表達(dá)變化。
　　方法：建立高脂飲食誘導(dǎo)肥胖母鼠模型，待子鼠21天齡斷乳時(shí)，對其肝臟R

5、NA進(jìn)行Affymetrix基因芯片檢測，對表達(dá)差異的基因進(jìn)行參數(shù)分析，同時(shí)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法驗(yàn)證芯片結(jié)果中肝臟內(nèi)脂酸合成和脂質(zhì)氧化相關(guān)基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：與CON-F1組子鼠比較，HF-F1組子鼠肝臟內(nèi)有120種基因表達(dá)異常，其中76種基因（63.3％）表達(dá)上調(diào)，44種基因（36.7%）表達(dá)下降。通過Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)做出層次聚類，篩選出高脂組中表達(dá)上調(diào)和下調(diào)的脂質(zhì)代謝相關(guān)的亞功能基因。芯片及實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)

6、果均顯示，脂質(zhì)合成的一些關(guān)鍵基因表達(dá)增加，如轉(zhuǎn)錄因子Srebf1及其下游靶基因Fas，Acaca在FI-HF組中的表達(dá)呈上升趨勢（P值分別為0.084，0.465和0.156），PPARγ表達(dá)呈下降趨勢（P=0.444），而脂質(zhì)合成相關(guān)的基因Me1和Scd1在HF-F1組中表達(dá)卻顯著升高（P值分別為0.002和0.027）。兩組子代肝臟中脂質(zhì)氧化分解相關(guān)的基因表達(dá)也有差異，HF-F1組中關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子PPARα及其靶基因脂肪酸β氧化限速酶

7、Cpt1α表達(dá)上調(diào)（P值分別為0.015和0.017），參與催化脂酸利用第一步的Acsl3基因表達(dá)下降（P=0.021），脫氫酶Ehhadh基因表達(dá)上調(diào)（P=0.001）。
　　結(jié)論：母鼠孕期持續(xù)至哺乳期的高脂飲食可抑制子代幼年期肝內(nèi)脂肪酸從頭合成途徑相關(guān)基因表達(dá)，誘導(dǎo)β氧化相關(guān)基因表達(dá)代償性增加，這可能與子代早期對不良壞境的暫時(shí)性應(yīng)激性保護(hù)作用有關(guān)，但這一代償作用尚不能阻止子代肝臟脂肪變性的發(fā)生。
　　第三部分：母代高脂飲

8、食對子鼠早期肝臟組織P53通路中相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　目的：觀察肝臟P53代謝通路中相關(guān)基因在母代高脂飲食下的子代幼年期中的表達(dá)變化。
　　方法：通過建立高脂飲食誘導(dǎo)肥胖母鼠模型對其子鼠21天齡斷乳時(shí)肝臟RNA進(jìn)行Affymetrix基因芯片分析篩選出的P53通路中，表達(dá)不同的基因進(jìn)行達(dá)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證。
　　結(jié)果：實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測示P53與其靶基因P21表達(dá)呈上升趨勢（P值分別為0.063和0.07