補(bǔ)腎方對(duì)埋植孕激素去勢(shì)小鼠孕激素及子宮內(nèi)膜的影響研究.pdf

1、近年來，在制劑、臨床領(lǐng)域?qū)τ诰徔蒯屩苿┧幬锏难芯枯^為活躍，并逐漸成為國內(nèi)外醫(yī)藥工業(yè)發(fā)展的重要方向之一。埋植劑作為緩控釋制劑的一個(gè)重要組成部分，因其具有使藥物生物活性增強(qiáng)、作用時(shí)間延長(zhǎng)、生物利用度高等特點(diǎn)，發(fā)展及應(yīng)用范圍越來越廣泛。
　　埋植劑作為控制藥物緩慢釋放體系，其目的是為了減小藥物副作用，保持穩(wěn)定的血藥濃度，從而達(dá)到藥物在體內(nèi)的最佳療效而設(shè)計(jì)。本實(shí)驗(yàn)研究的對(duì)象為孕激素埋植劑，主要是通過觀察埋植劑在體外、去勢(shì)小鼠體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)研究

2、，驗(yàn)證埋植劑釋放度的穩(wěn)定性，為課題研究提供必要的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。孕激素埋植劑目前廣泛應(yīng)用于計(jì)劃生育領(lǐng)域，其臨床最常見的副作用為子宮內(nèi)膜的異常變化，導(dǎo)致出血和月經(jīng)紊亂，嚴(yán)重影響了婦女使用埋植劑避孕過程中的生活質(zhì)量，現(xiàn)階段尚無有效的藥物。而中醫(yī)認(rèn)為腎為先天之本，腎“藏精，主生殖”，是人體生命活動(dòng)的根源。本實(shí)驗(yàn)通過給予去勢(shì)小鼠應(yīng)用補(bǔ)腎方，觀察中藥補(bǔ)腎方對(duì)應(yīng)用埋植劑去勢(shì)小鼠孕激素含量以及子宮內(nèi)膜的改變，探討補(bǔ)腎方對(duì)埋植孕激素去勢(shì)小鼠的影響，以期為

3、臨床應(yīng)用補(bǔ)腎中藥改善或治療子宮內(nèi)膜變化性疾病奠定科學(xué)數(shù)據(jù)。
　　第一部分埋植劑孕激素管的穩(wěn)定性研究
　　目的:研究孕激素皮下埋植劑在體外與去勢(shì)小鼠體內(nèi)的釋放度，評(píng)價(jià)本埋植劑藥物釋放的均勻性與穩(wěn)定性。
　　方法:
　　1、自制孕激素管埋植劑。
　　2、體外研究用紫外分光光度法測(cè)定藥物的含量，研究藥物的體外釋放度。
　　3、體內(nèi)研究選用清潔級(jí)KM雌性小鼠，試養(yǎng)1周后將小鼠的雙側(cè)卵巢摘除，恢復(fù)1周后將孕激素

4、管埋植劑埋入小鼠的頸部皮膚松弛處皮下，后分別在96h(96h×1)、192h(96h×2)、288h(96h×3)取出，并用電子分析天平測(cè)其失重，計(jì)算藥物的體內(nèi)釋放度。
　　結(jié)果:
　　1、體外實(shí)驗(yàn)顯示:體外96h(96h×1)、192h(96h×2)、288h(96h×3)釋放液的吸光值平均范圍分別為:0.52-0.79;0.53-0.76;0.53-0.78。
　　2、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示孕激素釋放量:①體內(nèi)96h(96h

5、×1)時(shí)分別為1.12mg，1.08mg，1.13mg，1.06mg，1.14mg;②體內(nèi)192h(96h×2)時(shí)分別為1.89mg，1.93mg，2.02mg，2.00mg，1.96mg;③體內(nèi)288h(96h×3)時(shí)分別為2.72mg，2.81mg,2.79mg,2.90mg,2.86mg。
　　結(jié)論:
　　1、體外實(shí)驗(yàn)表明，孕酮埋植劑在96h(96h×1)、192h(96h×2)、288h(96h×3)時(shí)，藥物釋放的吸

6、光度值保持恒定，表明孕酮埋植劑釋放度均勻穩(wěn)定。
　　2、孕酮埋植劑在96h(96h×1)、192h(96h×2)、288h(96h×3)內(nèi)，體內(nèi)釋放平均速率基本相同，表明孕酮埋植劑具有恒定的藥物釋放速率，符合零級(jí)釋放。
　　3、該孕酮埋植劑管釋放穩(wěn)定，可用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中孕酮持續(xù)恒定的給藥設(shè)計(jì)。
　　第二部分補(bǔ)腎方對(duì)去勢(shì)小鼠子宮內(nèi)膜的影響研究
　　目的:通過觀察補(bǔ)腎方對(duì)埋植孕激素去勢(shì)小鼠出血模型的干預(yù)，研究補(bǔ)腎方對(duì)持

7、續(xù)96h(96h×1)、192h(96h×2)、288h(96h×3)埋植孕激素去勢(shì)小鼠血清中孕激素含量及子宮內(nèi)膜的影響。
　　方法:
　　1、去勢(shì)小鼠出血模型的建立:選用清潔級(jí)KM雌性小鼠，試養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常組、模型組、補(bǔ)腎組。將小鼠雙側(cè)卵巢摘除，恢復(fù)1周以清除體內(nèi)激素的干擾。正常組小鼠給予水、飼料飼養(yǎng);模型組與對(duì)照組小鼠埋入皮埋劑，后于每天上午8-9點(diǎn)時(shí)給予補(bǔ)腎組小鼠灌胃補(bǔ)腎方藥液20g/(kg·d)，給予模型組小

8、鼠灌胃等量生理鹽水。
　　2、三組小鼠分別在埋植孕激素的96h(96h×1)、192h(96h×2)、288h(96h×3)時(shí)，將小鼠處死，取血，分離血清，應(yīng)用放射免疫法檢測(cè)孕激素的含量。
　　3、與此同時(shí)，摘取上述各組小鼠的子宮，觀察小鼠子宮形態(tài)學(xué)的變化，進(jìn)行拍照并稱重，計(jì)算子宮系數(shù);制作子宮切片，于顯微鏡下觀察其結(jié)構(gòu)并拍照。
　　結(jié)果:
　　1、去勢(shì)小鼠血清中孕激素含量的變化
　　正常組小鼠血清中孕激素

9、含量在96h(96h×1)為0.82±0.92pg/mL，192h(96h×2)為0.79±0.93pg/mL，288h(96h×3)為0.80±0.95pg/mL，隨時(shí)間變化孕激素含量無明顯變化;模型組小鼠血清中孕激素含量在96h(96h×1)為21.10±0.90pg/mL，192h(96h×2)為35.23±1.32pg/mL，288h(96h×3)為45.51±1.03pg/mL，與正常組相比呈現(xiàn)隨時(shí)間上升的趨勢(shì)(P＜0.05）

10、;補(bǔ)腎組小鼠血清中孕激素含量96h(96h×1)為18.22±0.97pg/mL，192h(96h×2)為16.93±1.21pg/mL，288h(96h×3)h為14.69±0.93pg/mL，與模型組相比，除96h無明顯變化外，其余兩組均明顯降低（P＜0.05）。
　　2、小鼠子宮內(nèi)膜的變化
　　2.1子宮形態(tài)學(xué)的觀察
　　正常組小鼠子宮角通體為乳白色，兩側(cè)大小均勻，隨時(shí)間延長(zhǎng)無明顯的變化。模型組小鼠子宮角在96h

11、稍有腫脹，顏色呈淺粉色;192h腫脹與96h變化不大，顏色呈淡粉紅;288h時(shí)腫脹較為明顯，外被覆毛細(xì)血管。補(bǔ)腎組小鼠子宮角在96h稍有腫脹，內(nèi)有液體充盈，顏色呈現(xiàn)淡粉色;192h子宮增大，毛細(xì)血管漸豐富，顏色呈現(xiàn)粉紅色;288h腫脹明顯，且可以看到大量的紅色毛細(xì)血管充盈。
　　2.2去勢(shì)小鼠子宮指數(shù)的變化
　　正常組小鼠子宮指數(shù)在96h(96h×1)為0.16±0.04g/g，192h(96h×2)為0.15±0.04 g

12、/g，288h(96h×3)為0.16±0.03 g/g，隨時(shí)間變化子宮指數(shù)無明顯變化;模型組小鼠子宮指數(shù)在96h(96h×1)為0.16±0.04 g/g，192h(96h×2)為0.21±0.05 g/g，288h(96h×3)為0.26±0.04 g/g，與正常組相比，除96h無明顯變化外，其余兩組均明顯升高(P＜0.05）;補(bǔ)腎組小鼠子宮指數(shù)在96h(96h×1)為0.15±0.03 g/g，192h(96h×2)為0.22±0

13、.05g/g，288h(96h×3)為0.19±0.03 g/g，與模型組相比，96h與192h無明顯變化，288h子宮指數(shù)明顯降低(P＜0.05)。
　　2.3子宮內(nèi)膜的組織形態(tài)學(xué)觀察
　　正常組小鼠子宮內(nèi)膜間質(zhì)致密，為單層柱狀上皮，核質(zhì)較高，細(xì)胞核呈橢圓狀。模型組小鼠子宮內(nèi)膜在96h內(nèi)膜變厚，間質(zhì)中腺體數(shù)量增多，螺旋小動(dòng)脈逐漸發(fā)育;192h比96h變化明顯，螺旋小動(dòng)脈進(jìn)一步增生;288h時(shí)內(nèi)膜較厚，間質(zhì)疏松，螺旋小動(dòng)脈減