PQ401對脂多糖誘導(dǎo)的急性腹膜炎小鼠的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：
　　PQ401是一種選擇性的胰島素樣生長因子1受體（IGF-1R）抑制劑。本研究旨在觀察PQ401對脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的急性腹膜炎的保護效應(yīng)，并探討其作用機制，以期為腹膜炎的臨床治療提供新策略。
　　方法：
　　采用LPS誘導(dǎo)建立C57BL/6小鼠急性腹膜炎模型。將小鼠隨機分配為對照組、模型組、PQ401組（25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg）。給藥12h后將小鼠全部處死，采集小鼠血和肝組織，分

2、別提取血清和蛋白后凍存。觀察小鼠的身體狀態(tài)，評價PQ401對小鼠精神狀態(tài)和活動的影響。通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清和肝組織勻漿中的腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素（IL-1β、IL-6）的濃度，評價PQ401對急性腹膜炎小鼠炎癥因子的影響。全自動生化分析儀檢測血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性及總膽紅素（TBIL）濃度，評價PQ401對腹膜炎小鼠肝臟的影響。通過蛋白印跡實驗（Wester

3、n blot）檢測小鼠肝細胞中核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）的表達，探究PQ401抗炎作用的分子機制。
　　在體外實驗中，通過LPS誘導(dǎo)RAW264.7細胞建立體外炎癥模型。給予不同濃度PQ401治療后，不同時間點收集細胞上清液和細胞蛋白。ELISA法檢測細胞上清的炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的濃度，評價PQ401對巨噬細胞的抗炎作用。通過Western blot檢測IGF-1R磷酸化水平，評價PQ401與IGF-1R

4、磷酸化的關(guān)系。通過加入IGF-1和IGF-IRα/β shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染兩種方式，評價IGF-1R信號通路與PQ401抗炎效應(yīng)的關(guān)系。通過Western blot檢測巨噬細胞的NF-κB信號通路，評價PQ401抗炎作用對NF-κB信號通路的影響。
　　結(jié)果：
　　在LPS誘導(dǎo)的小鼠急性腹膜炎模型中，模型組小鼠精神萎靡、活動減少，PQ401（25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg）組小鼠表現(xiàn)明顯好于模型組。PQ40

5、1能有效降低LPS誘導(dǎo)的急性腹膜炎小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的濃度，降低肝組織TNF-α、IL-1β的濃度。PQ401對小鼠血清ALT、AST的活性及TBIL的濃度無明顯影響。PQ401對肝細胞中NF-κ B的表達無明顯影響。
　　在體外實驗中，PQ401（0.1μM、1μM、10μM）分別作用6h、12h、24h，能有效降低LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞釋放炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的濃度。PQ401能抑制炎

6、性細胞中IGF-1R磷酸化。加入IGF-1活化IGF-1R或者IGF-1Rα/β shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染巨噬細胞低表達IGF-1R，均不能影響PQ401的抗炎效應(yīng)。PQ401對LPS誘導(dǎo)的NF-κB信號通路無影響。
　　結(jié)論：
　　PQ401在體內(nèi)外均具有抗炎作用。但是PQ401的抗炎效應(yīng)與抑制IGF-1R磷酸化無相關(guān)性，說明IGF-1R不是PQ401發(fā)揮抗炎效應(yīng)的有效靶點。PQ401對LPS誘導(dǎo)的NF-κB信號通路無影響，說