丁苯羥酸對脂多糖誘導小鼠急性肺損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、急性肺損傷（Acute lung injury,ALI）是由各種非心源性嚴重肺內外因素導致的肺毛細血管彌漫性損傷、通透性增加，進而演變?yōu)榉嗡[、透明膜形成和肺不張為主要病理學特征的疾病。ALI的主要臨床表現為急性進行性加重的呼吸困難和難治性低氧血癥，病情進一步惡化后，可形成急性呼吸窘迫綜合征（Acute respiratory distress syndrome,ARDS）。ALI/ARDS發(fā)病機制的實質是炎癥反應的失控而導致彌漫性肺損

2、傷和呼吸功能障礙。在臨床上除了保護性機械通氣外，目前并沒有很好的治療藥物上市，因此開發(fā)新型治療藥物或靶點具有非常重要的理論和實際意義。
　　丁苯羥酸是一種已上市多年的非甾體抗炎藥，對治療類風濕性關節(jié)炎、濕疹和其它多種皮膚炎癥等有較好的療效，但其抗炎的作用機制目前仍不清楚。中性粒細胞趨化是造成急性肺損傷中炎癥失控的根本原因，由白三烯A4水解酶（Leukotriene A4hydrolase,LTA4H）催化生成的白三烯B4(Leuk

3、otriene B4,LTB4)是介導中粒細胞趨化的強效趨化因子之一，因此LTA4H抑制劑可以作為急性肺損傷的候選治療藥物。我們通過LTA4H抑制劑高通量篩選平臺對已上市藥物庫進行了篩選，發(fā)現丁苯羥酸可以作為一種LTA4H抑制劑，能夠有效地抑制LTA4水解為LTB4，從而影響中性粒細胞的趨化，對急性肺損傷起保護作用。本文利用結構生物學和小鼠急性肺損傷模型研究了丁苯羥酸對LTA4H活性的特異性抑制及其抑制作用位點，以及對脂多糖誘導的小鼠急

4、性肺損傷的保護作用，并從分子水平上驗證了丁苯羥酸對急性肺損傷的保護作用與抑制核因子（Nuclear factorκB,NF-κB）信號通路和絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen activated protein kinase,MAPK）信號通路中關鍵蛋白活化的相關性。
　　本論文的主要研究內容和研究結果如下：
　?、盼覀冊贚TA4H抑制劑高通量篩選平臺上對已上市藥物庫進行篩選，發(fā)現丁苯羥酸可以作為一種LTA4H抑制劑，并對L

5、TA4H-Bufexamac復合物晶體結構進行了X-射線衍射解析。發(fā)現丁苯羥酸能與LTA4H的L型狹窄活性口袋結合，即丁苯羥酸的羰基和羥基特異性地與LTA4H的活性位點中的三個關鍵氨基酸殘基（Glu296,Glu318和Tyr383）和Zn2+結合,這一結果為闡明丁苯羥酸特異性抑制LTA4H活性的分子機制提供了證據。
　　⑵利用ELISA法和細胞遷移侵襲試驗，檢測了丁苯羥酸對中性粒細胞中LTB4合成和對中性粒細胞趨化的影響。發(fā)現丁

6、苯羥酸是通過抑制LTA4H進而有效地抑制LTB4的產生和中性粒細胞趨化。
　?、墙⒘酥嗵牵↙ipopolysaccharide,LPS）誘導的小鼠急性肺損傷模型，研究了丁苯羥酸對小鼠ALI的保護作用。證明了丁苯羥酸可以抑制LPS誘導ALI的NF-κB的過度活化，并參與阻斷MAPK信號通路中三個關鍵蛋白激酶（p38MAPK、ERK、JNK）的磷酸化，從而對LPS誘導的小鼠急性肺損傷具有保護作用。
　　⑷運用計算機輔助藥物設