COG1410對(duì)創(chuàng)傷性腦水腫及糖攝取的影響及機(jī)制研究.pdf

1、載脂蛋白E（Apolipoprotein E, APOE表示基因，apoE表示蛋白）是腦組織中最主要的載脂蛋白，不僅參與神經(jīng)系統(tǒng)的脂質(zhì)代謝及膽固醇調(diào)節(jié)，而且具有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用。研究發(fā)現(xiàn)，TBI后，APOE基因敲除鼠較野生鼠BBB破壞更顯著，腦含水量增加更明顯，神經(jīng)功能缺失更嚴(yán)重。通過(guò)腦室注射外源性apoE后可減輕腦損傷后神經(jīng)功能損傷。但是，apoE全肽蛋白由于分子量過(guò)大不能通過(guò)BBB，限制了其臨床應(yīng)用。然而，來(lái)源于apoE受體結(jié)合區(qū)

2、域的短肽COG1410可自由通過(guò)BBB，并且保留了apoE全肽的神經(jīng)保護(hù)作用。我們前期的研究以及其他研究發(fā)現(xiàn)，COG1410明顯抑制TBI后炎癥應(yīng)激，氧化應(yīng)激，減輕TBI后神經(jīng)元凋亡以及創(chuàng)傷性軸突損傷等繼發(fā)性腦損傷多種病理變化，明顯改善TBI后動(dòng)物神經(jīng)功能。然而，目前尚未有研究報(bào)道COG1410對(duì)TBI后腦水腫的影響。本課題分別研究COG1410對(duì)TBI后血管源性腦水腫及細(xì)胞毒性腦水腫的影響，并進(jìn)一步評(píng)價(jià)TBI后COG1410對(duì)損傷灶腦

3、組織糖攝取的影響。
　　目的:
　　探討載脂蛋白 E短肽COG1410對(duì)TBI后腦水腫及糖攝取的影響。
　　方法:
　　1、評(píng)價(jià) COG1410對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷后血管源性腦水腫的影響。星形膠質(zhì)細(xì)胞與腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)構(gòu)建離體BBB模型。分為正常對(duì)照組，氧糖剝奪組，氧糖剝奪后COG1410干預(yù)組，通過(guò)檢測(cè)跨內(nèi)皮細(xì)胞電阻（TEER）以及伊文思藍(lán)（EB）通透率反應(yīng)BBB通透性的變化，明膠酶譜法檢測(cè)MMP-9活性，we

4、stern blot檢測(cè)緊密連接蛋白表達(dá)。以PSI顱腦損傷撞擊器精確打擊制備 TBI模型，分為正常對(duì)照組，假手術(shù)組，TBI+生理鹽水組及TBI+COG1410組，以傷后1d、3d作為研究時(shí)間點(diǎn)。通過(guò)轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠運(yùn)動(dòng)功能，檢測(cè)傷側(cè)半腦EB含量評(píng)價(jià) BBB通透性的變化，T2WI檢測(cè)損傷灶大小及血管源性腦水腫，明膠酶譜法檢測(cè)MMP-9活性，western blot檢測(cè)緊密連接蛋白表達(dá)。
　　2、評(píng)價(jià) COG1410對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷后細(xì)

5、胞毒性腦水腫的影響。構(gòu)建 TBI模型，分為正常對(duì)照組，假手術(shù)組， TBI+生理鹽水組及TBI+COG1410組，以傷后1d、3d作為研究時(shí)間點(diǎn)。RT-PCR,免疫組化及western blot法檢測(cè)小鼠傷灶周邊腦皮質(zhì)水通道蛋白4（AQP-4）表達(dá)，DWI檢測(cè)小鼠傷灶周邊腦皮質(zhì)表觀擴(kuò)散系數(shù)（ADC）值。
　　3、評(píng)價(jià)COG1410對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷后糖攝取的影響。構(gòu)建TBI模型，分為正常對(duì)照組，TBI+生理鹽水組及TBI+COG1410

6、組，以傷后1d、3d作為研究時(shí)間點(diǎn)，Micro PET/CT檢測(cè)損傷灶皮質(zhì)18F-FDG攝取值。
　　結(jié)果:
　　1、COG1410減輕創(chuàng)傷性腦損傷后血管源性腦水腫。氧糖剝奪1 h后離體BBB模型TEER值達(dá)到最低值，EB通透性明顯增加，MMP-9活化，緊密連接蛋白降解。COG1410干預(yù)后明顯抑制氧糖剝奪后離體BBB模型通透性增加，抑制 MMP-9活性，抑制緊密連接蛋白降解。TBI后急性期小鼠運(yùn)動(dòng)功能明顯受損，傷側(cè)半腦EB

7、通透性增加，血管源性腦水腫明顯，MMP-9活化，緊密連接蛋白降解。COG1410干預(yù)后明顯改善小鼠運(yùn)動(dòng)功能，降低BBB通透性，減小損傷灶，減輕血管源性腦水腫，抑制MMP-9活性，抑制緊密連接蛋白降解。
　　2、COG1410減輕創(chuàng)傷性腦損傷后細(xì)胞毒性腦水腫。TBI后小鼠傷灶周邊皮質(zhì)AQP-4表達(dá)明顯增加，ADC值明顯降低。COG1410干預(yù)后明顯抑制TBI后1d、3d傷灶周邊皮質(zhì)AQP-4過(guò)表達(dá)，抑制TBI后3d傷灶周邊皮質(zhì)ADC