阿托伐他汀對缺血性大鼠腦水腫的影響及機制探討.pdf

1、背景與目的
　　近年來，腦卒中的發(fā)病率和患病率逐年增高，成為神經(jīng)內(nèi)科最常見疾病。在世界范圍內(nèi)，腦卒中成為緊隨心臟病的第二大死因；而在中國是第一大死因。急性缺血性腦卒中（acute ischemic stroke,AIS）占腦卒中總發(fā)病率80％左右，常導(dǎo)致患者偏癱、失語、認知功能障礙、抑郁癥等不良事件，給社會、家庭和患者帶來沉重的負擔(dān)和巨大的痛苦。盡早開通閉塞血管、恢復(fù)血流是治療的關(guān)鍵措施，首選治療是溶栓，但臨床中真正受益者不足3%

2、；血管內(nèi)治療目前正處于探索階段，從中獲益的患者更少。絕大多數(shù)AIS不僅造成神經(jīng)細胞壞死、凋亡、自噬、炎癥反應(yīng)，而且使水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)激活和血腦屏障(blood-brain barrier，BBB)破壞，導(dǎo)致腦水腫、顱內(nèi)壓升高，造成腦組織二次損傷。因此，探索其發(fā)病機制以及防治措施成為國內(nèi)外研究熱點。
　　腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）是關(guān)鍵的炎癥因子，在正常

3、腦組織內(nèi)處于低水平表達。AIS可使腦組織內(nèi)TNF-α表達增加，因它是炎癥反應(yīng)的起始因子，并誘導(dǎo)IL-1、IL-6、IL-8、FM-CSF等細胞因子表達，共同參與炎性反應(yīng)及免疫應(yīng)答，還可造成腦水腫，加重腦組織損傷。AQP-4是水通道蛋白的一個亞型，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)最早、含量最豐富、分部最廣的水通道蛋白，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起著重要作用，不僅調(diào)節(jié)正常腦組織水代謝，而且對缺血性腦水腫起著重要的作用。
　　他汀類藥物是3-羥基-3-甲基戊

4、二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，除了調(diào)脂、穩(wěn)定斑塊外，還具有抗炎、抗凋亡、抗自噬、抗自由基、促進血管再生、促進神經(jīng)元再生等多種神經(jīng)保護作用，是臨床治療缺血性腦卒中的一線用物，被國內(nèi)外多個指南推薦用于治療動脈粥樣硬化性心血管疾?。ˋtherosclerotic Cardiovascular Disease,ASCVD）的二級預(yù)防。阿托伐他汀(atorvastatin)是常用的調(diào)脂藥物，具有安全性高、耐受性好的優(yōu)點；但目前尚不清楚

5、阿托伐他汀是否可通過影響TNF-α表達進而影響AQP-4表達而減輕腦水腫，鑒于此，本實驗通過建立局灶性腦缺血大鼠模型，觀察缺血后大鼠腦組織含水量、TNF-α、AQP-4的動態(tài)變化，進而探討阿托伐他汀對其影響的機制,為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　材料與方法
　　選用108只健康雄性SD大鼠，體重300±20g，隨機分為假手術(shù)組、模型組、治療組，每組各有36只；每組再按時間點分為三個亞組：1d組、3d組、7d組，每個亞組12只。

6、
　　假手術(shù)組只分離左側(cè)頸部血管，不結(jié)扎，不插線；模型組和治療組采用左側(cè)大腦中動脈栓塞（Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO）法制備永久性局灶性腦缺血模型，大鼠清醒后按 Longa5分進行評分，1-3分為成功模型。假手術(shù)組和模型組用1ml生理鹽水灌胃，每天給藥一次持續(xù)到相應(yīng)觀察時間點；治療組給予阿托伐他汀鈣片4mg/(kg·d)灌胃（阿托伐他汀用1ml生理鹽水溶解），每天給藥一次持續(xù)到相應(yīng)觀察

7、時間點。
　　每只大鼠在處死前分別以 Longa評分法做神經(jīng)功能缺損評分，腦水腫情況用腦組織含水量表示，RT-PCR檢測 TNF-α mRNA、AQP-4 mRNA，Western blotting檢測AQP-4蛋白。
　　結(jié)果
　　1.Longa神經(jīng)功能評分
　　各組大鼠在處死前進行神經(jīng)功能評分。假手術(shù)組大鼠未見神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，評分均為0，模型組和治療組大鼠均可見不同程度神經(jīng)功能缺損癥狀；且在相同時間點各組間

8、神經(jīng)功能評分差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。
　　2.腦組織含水量
　　假手術(shù)組腦組織含水量無明顯動態(tài)變化，而模型組和治療組腦組織含水量在第1d天升高，第3d達到高峰，第7d有所下降；在相同觀察時間點，與假手術(shù)組相比，模型組和治療組腦組織含水量均升高（P<0.001）；與模型組相比，治療組腦組織含水量均降低（P<0.001）。
　　3.TNF-αmRNA
　　假手術(shù)組TNF-α mRNA表達量無明顯動態(tài)變化，

9、而模型組和治療組TNF-αmRNA表達量在第1d天升高，第3d達到高峰，第7d有所下降；在相同觀察時間點，與假手術(shù)組相比，模型組和治療組TNF-αmRNA表達量均升高（P<0.001）；與模型組相比，治療組TNF-αmRNA表達量均降低（P<0.001）。
　　4.AQP-4 mRNA和AQP-4蛋白
　　AQP-4 mRNA和AQP-4蛋白表達量的動態(tài)變化與TNF-αmRNA表達量的動態(tài)變化非常相似。即在假手術(shù)組中未發(fā)現(xiàn)明

10、顯變化，而在模型組和治療組AQP-4 mRNA和AQP-4蛋白表達量在第1d天升高，第3d達到高峰，第7d有所下降。在相同觀察時間點，與假手術(shù)組相比，模型組和治療組AQP-4 mRNA和AQP-4蛋白表達量均升高（P<0.001）；與模型組相比，治療組AQP-4 mRNA和AQP-4蛋白表達量均降低（P<0.001）。
　　5. TNF-αmRNA和AQP-4 mRNA表達量的相關(guān)性分析
　　假手術(shù)組TNF-αmRNA與AQ

11、P-4 mRNA表達量在各時間點不存在線性相關(guān)（P>0.05）；模型組、治療組TNF-α mRNA與AQP-4 mRNA表達量在各時間點存在線性相關(guān)（P<0.05），且為正相關(guān)。
　　結(jié)論
　　1.局灶性腦缺血大鼠腦水腫呈動態(tài)變化，先加重后好轉(zhuǎn)，在第3天最嚴重。
　　2.阿托伐他汀可能減少局灶性腦缺血所致的神經(jīng)功能缺損癥狀，具有腦保護作用；其腦保護作用可能與減少腦缺血后腦水腫有關(guān)。
　　3.阿托伐他汀可能通過抑制