RBMS3在HPV16相關(guān)宮頸鱗癌發(fā)生中的作用.pdf

1、背景:
　　高危型人乳頭瘤病毒(high risk-human papillomaviruses，HR-HPVs)感染在宮頸癌發(fā)生中具有重要作用，其早期基因E7的持續(xù)表達(dá)是其致癌的關(guān)鍵，E7蛋白可通過多種途徑誘導(dǎo)細(xì)胞異常增殖。抑癌基因RNA結(jié)合基序單鏈相互作用蛋白3（RNA binding motif, single-stranded-interacting protein3，RBMS3）在正常組織廣泛表達(dá)，而在癌細(xì)胞系和原發(fā)性腫

2、瘤中表達(dá)顯著降低。本課題組經(jīng)Agilent人基因表達(dá)譜芯片分析，發(fā)現(xiàn)沉默E7表達(dá)后，RBMS3表達(dá)上調(diào)。
　　目的:
　　以HPV16 E7表達(dá)陽性的宮頸鱗癌組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelialneoplasia，CIN)組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細(xì)胞株（宮頸癌SiHa細(xì)胞）以及HPV16 E7表達(dá)陰性的宮頸鱗癌組織、CIN組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細(xì)胞株（宮頸癌C33-A細(xì)胞）為研

3、究對象，探討HPV16相關(guān)宮頸癌發(fā)生中RBMS3的表達(dá)及作用，以期為進一步研究HPV16相關(guān)宮頸癌防治方法提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1.通過Western blotting方法檢測RBMS3在HPV16 E7表達(dá)陽性的宮頸癌SiHa細(xì)胞和HPV16 E7表達(dá)陰性的宮頸癌C33-A細(xì)胞中的表達(dá)。
　　2.通過免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）染色方法檢測RBMS3在HPV16E7表達(dá)陽

4、性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織和HPV16 E7表達(dá)陰性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織中的表達(dá)，并分析二者表達(dá)的關(guān)系。
　　3.常規(guī)培養(yǎng)宮頸癌C33-A細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA并定量，通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)方法擴增RBMS3基因編碼序列(coding sequence，CDS)，構(gòu)建真核表達(dá)

5、重組質(zhì)粒peDNA3.1-RBMS3并鑒定，經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)將pcDNA3.1-RBMS3重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HPV16 E7表達(dá)陽性的宮頸癌SiHa細(xì)胞，通過生長曲線、克隆形成率、AnnexinⅤ-FITC/PI結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)等方法觀察穩(wěn)定表達(dá)RBMS3對SiHa細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　結(jié)果:
　　1.Western blotting結(jié)果顯示:①HPV16 E7在宮頸癌C33-A細(xì)胞中不表達(dá)，而HPV16 E7在宮頸癌SiHa細(xì)胞

6、中表達(dá)。②C33-A細(xì)胞中RBMS3的表達(dá)顯著高于SiHa細(xì)胞(P＜0.01)。
　　2.IHC結(jié)果顯示:RBMS3在HPV16 E7表達(dá)陽性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織和宮頸鱗癌組織中的表達(dá)均分別顯著低于其在HPV16 E7表達(dá)陰性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織和宮頸鱗癌組織癌組織中的表達(dá)，二者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。
　　3.①細(xì)胞生長曲線和倍增時間計算結(jié)果顯示:SiHa-RBMS3細(xì)胞的生長速度較SiHa-ve

7、ct細(xì)胞的生長速度顯著減慢(P＜0.01)，倍增時間顯著延長(P＜0.01)。②平板克隆形成實驗結(jié)果顯示:SiHa-RBMS3細(xì)胞的克隆形成均數(shù)顯著低于SiHa-vect細(xì)胞的克隆形成均數(shù)(P＜0.01)，克隆體積也較小。③AnnexinⅤ-FITC/PI結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:SiHa-RBMS3細(xì)胞凋亡均數(shù)明顯高于SiHa-vectt細(xì)胞(P＜0.01)，SiHa-RBMS3細(xì)胞和SiHa-vect細(xì)胞凋亡細(xì)胞百分比分別為:11.5