腦紅蛋白在腦梗死大鼠的表達(dá)及丁苯酞干預(yù)效應(yīng).pdf

1、背景與目的：
　　腦血管疾?。–VD）是危害中老年人身體健康和生命的主要疾病，也是目前導(dǎo)致人類死亡的第二位原因，它與缺血性心臟病、惡性腫瘤構(gòu)成多數(shù)國家的三大疾病。CVD包括缺血性卒中和出血性卒中，以突然發(fā)病、迅速出現(xiàn)局灶性或彌散性腦功能缺損為共同臨床特征，為一組器質(zhì)性腦損傷導(dǎo)致的腦血管疾病。其中高發(fā)病率、高致殘率和高死亡率的缺血性腦血管?。↖CVD）給社會和家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)和痛苦。隨著人口老齡化，ICVD造成的危害日趨嚴(yán)重。因此研

2、究其發(fā)病機(jī)制并尋求有效的治療藥物成為目前神經(jīng)病學(xué)的熱點(diǎn)問題。腦能量來源主要依賴于糖的有氧代謝，幾乎無能量儲備，因此腦組織對缺血缺氧性損害十分敏感。腦梗死時導(dǎo)致神經(jīng)元缺血缺氧，能量代謝紊亂，氧化應(yīng)激損傷，線粒體功能紊亂以及細(xì)胞死亡。如果增加腦梗死患者氧氣（O2）供應(yīng)，減少氧化應(yīng)激損傷勢必能夠減輕腦組織的病理損傷?；诖吮菊n題從改善腦梗死后 O2供應(yīng)及減少氧化應(yīng)激損傷進(jìn)行研究。
　　丁苯酞（NBP）是從芹菜種子中分離出的有效成分，又叫

3、作芹菜甲素，可阻斷腦梗死所致?lián)p傷的多個病理環(huán)節(jié)，具有較強(qiáng)抗腦缺血損傷作用。其能夠明顯縮小大鼠腦梗塞的面積，減輕腦水腫，改善缺血區(qū)能量代謝和微循環(huán)及血流量，抑制神經(jīng)元凋亡，以及抗血小板聚集和抗腦血栓形成等藥理作用。NBP具有明確抗腦缺血作用，但其詳盡機(jī)制未完全闡明。本實(shí)驗(yàn)對大鼠腦缺血后腦紅蛋白（NGB）表達(dá)進(jìn)行動態(tài)觀察及NBP是否調(diào)節(jié)NGB表達(dá)，減少氧化應(yīng)激損傷進(jìn)行研究，從而為進(jìn)一步探討NGB，NBP對腦梗死患者的作用提供一些價值。

4、>　　材料與方法：
　　線栓法制作 SD大鼠永久性大腦中動脈腦缺血模型。健康成年雄性清潔級SD大鼠108只，體重280g~350g。隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組、模型組、治療組，每組按術(shù)后不同的處死時間又分為三個亞組：1d、3d和7d，每個亞組各12只。NBP原料藥用植物油制成濃度為32mg/ml的溶劑用于動物灌胃。治療組于術(shù)后兩小時按80mg/kg丁苯酞植物油灌胃，假手術(shù)組和模型組予等量植物油灌胃，一天兩次。每只大鼠在術(shù)后3h和處死前

5、行神經(jīng)功能缺損評分并在既定時間點(diǎn)處死大鼠，斷頭取腦。HE染色觀察組織病理學(xué)改變；RT-PCR和免疫組化法檢測不同時間點(diǎn)各組腦紅蛋白（NGB）表達(dá)；羥胺法和TBA法分別檢測不同時間點(diǎn)各組超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。
　　結(jié)果：
　　1. Longa神經(jīng)功能缺損評分：假手術(shù)組大鼠未見神經(jīng)功能缺損癥狀，評分為0；模型組和治療組大鼠均可見不同程度神經(jīng)功能缺損癥狀，兩組術(shù)后3h評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05

6、），各時間點(diǎn)處死前評分差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　2. HE染色：假手術(shù)組腦組織：神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞輪廓清晰，排列整齊，胞漿豐富，淡染，細(xì)胞核大且圓，核仁清晰，細(xì)胞周圍間隙致密無水腫，無炎癥細(xì)胞浸潤；模型組腦組織：梗死灶中心神經(jīng)元輪廓模糊，排列紊亂，數(shù)量減少，可見凋亡小體，缺血梗死周圍有膠質(zhì)細(xì)胞增生，間質(zhì)腫脹稀疏；治療組腦組織：與模型組相比神經(jīng)元結(jié)構(gòu)尚清晰，間質(zhì)水腫明顯減輕，胞核與胞質(zhì)尚能分清。
　　3.RT-P

7、CR檢測NGB mRNA表達(dá)：假手術(shù)組少量表達(dá)NGB mRNA，且各時間點(diǎn)表達(dá)無明顯差異(P>0.05)；模型組、治療組NGB mRNA表達(dá)增多，各時間點(diǎn)模型組較假手術(shù)組增高，治療組較模型組、假手術(shù)組均增高，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；模型組和治療組NGB mRNA表達(dá)隨時間延長逐漸減少。
　　4.免疫組化檢測NGB蛋白表達(dá)：假手術(shù)組NGB弱陽性表達(dá)，且各時間點(diǎn)表達(dá)無明顯差異(P>0.05)；模型組、治療組NGB表達(dá)增多

8、，各時間點(diǎn)模型組較假手術(shù)組增高，治療組較模型組、假手術(shù)組均增高，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；模型組和治療組NGB表達(dá)隨時間延長逐漸減少。
　　5.羥胺法SOD活性檢測：假手術(shù)組SOD活性高，且各時間點(diǎn)活性無明顯差異(P>0.05)；模型組、治療組SOD活性減低，各時間點(diǎn)模型組較假手術(shù)組減低，治療組較模型組增高、較假手術(shù)組減低，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；隨時間延長，模型組和治療組SOD活性逐漸減低。
　　

9、6.TBA法MDA含量檢測：假手術(shù)組MDA含量少，且各時間點(diǎn)含量無明顯差異(P>0.05)；模型組、治療組MDA含量增加，各時間點(diǎn)模型組較假手術(shù)組增加，治療組較模型組減少、較假手術(shù)組增加，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；隨時間延長，模型組和治療組MDA含量逐漸減少。
　　結(jié)論：
　　1.局灶性腦缺血大鼠腦組織NGB表達(dá)上調(diào)，且主要在缺血早期發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
　　2.丁苯酞可通過上調(diào)NGB表達(dá)，減少氧化應(yīng)激損傷，