丁苯酞對大鼠肝組織甘油三酯代謝相關(guān)基因表達的影響.pdf

1、目的:丁苯酞具有改善局部腦缺血區(qū)微循環(huán)和血流量,保護線粒體的結(jié)構(gòu)和功能,縮小腦梗塞面積,減輕腦水腫等作用。在臨床上,丁苯酞廣泛用于治療缺血性腦血管病,并作為腦血管病后改善智能和功能恢復(fù)的首選用藥。從發(fā)病機制上看,腦血管病的發(fā)生與脂類代謝密切相關(guān),其中甘油三酯代謝異常是腦血管病發(fā)生的重要因素之一。目前國內(nèi)對丁苯酞與甘油三酯代謝的研究尚少見報道。有必要進一步研究丁苯酞對甘油三酯代謝的影響,以期在日后應(yīng)用丁苯酞治療腦缺血性疾病中,指導(dǎo)臨床合理

2、用藥。
　　 基因芯片(Gene chip)又稱DNA芯片(DNA chip),是一種新型的基因功能分析技術(shù),具有高通量、微型化和自動化的特點,成為后基因組時代基因功能分析的最重要技術(shù)之一。基因芯片的基本原理是堿基互補配對和分子雜交,是指將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段有規(guī)律地排列固定于支持物上,然后與待測的標記樣本基因按堿基配對原理進行雜交,再通過激光共聚焦熒光顯微鏡檢測系統(tǒng)等對芯片進行掃描,并配以計算機系統(tǒng)對熒光信號做出比

3、較和檢測,從而迅速得出所要的信息?；蛐酒夹g(shù)的優(yōu)點在于無需先前知道測試樣品中靶基因的作用情況,可同時觀察成千上萬個基因表達的結(jié)果,高效、快速、多參量地對基因進行檢測,從整體基因表達譜水平研究疾病。本研究對利用基因芯片技術(shù)獲得的不同劑量丁苯酞作用下,在不同用藥時間點大鼠肝臟基因數(shù)據(jù)的觀察,篩選出有意義基因,對其表達變化情況進行深入分析,從分子生物學水平掌握丁苯酞對甘油三酯代謝的影響,為臨床合理用藥提供幫助。
　　 方法:1數(shù)據(jù)取

4、得情況實驗大鼠12組,用不同劑量的丁苯酞灌胃3天、10天、20天、灌胃10天停藥10天?；蛐酒峙?一倍劑量組4片;兩倍劑量組4片;四倍劑量組4片。對雜交后的基因芯片通過共聚焦顯微鏡掃描取得掃描數(shù)據(jù)。
　　 2整理數(shù)據(jù)將已取得的不同劑量、不同時間點丁苯酞喂養(yǎng)大鼠后獲得的12個rat_384基因芯片檢測數(shù)據(jù)Excell文件進行整理。
　　 3篩選甘油三酯代謝相關(guān)基因找出甘油三酯代謝相關(guān)基因得出比值,并匯總為一個甘油三酯代

5、謝相關(guān)基因比值Excell文件。
　　 4找出甘油三酯代謝中有意義基因從甘油三酯代謝相關(guān)基因比值Excell文件中找出影響甘油三酯代謝的關(guān)鍵基因。
　　 結(jié)果:丁苯酞喂養(yǎng)大鼠后用大鼠rat_384基因芯片檢測,獲得4096個基因和表達序列,從中找出影響甘油三酯代謝的關(guān)鍵基因5個AF021348(線粒體甘油-3-磷酸脂酰轉(zhuǎn)移酶)、NM_012597(肝脂肪酶)、NM_017075(乙酰輔酶A乙酰轉(zhuǎn)移酶1)、BC087036

6、(極長鏈脂酰輔酶A脫氫酶)、NM_001004085(肉堿乙酰轉(zhuǎn)移酶),具體分析這幾個基因隨用藥劑量及用藥時間發(fā)生上調(diào)或下調(diào)而引起其表達變化的情況。
　　 1一倍劑量(60mg/kg/day)用藥3天有意義基因表達變化情況AF021348、NM_012597、BC087036、NM_001004085比值在正常范圍。NM_017075受到影響,上調(diào)超出正常范圍。
　　 2一倍劑量(60mg/kg/day)用藥10天有意義

7、基因表達變化情況AF021348、NM_012597、NM_017075、BC087036、NM_001004085這5個基因比值皆在正常范圍。其中,NM_017075在此用藥狀態(tài)下,下調(diào)到正常范圍。
　　 3一倍劑量(60mg/kg/day)用藥20天有意義基因表達變化情況NM_012597、NM_017075、BC087036、NM_001004085與此藥物劑量下用藥10天的情況相似,基因變化在正常范圍。而此時AF0213

8、48呈明顯上調(diào)趨勢。
　　 4一倍劑量(60mg/kg/day)用藥10天停藥10天有意義基因表達變化情況AF021348比值進一步增高,基因上調(diào)更加明顯。NM_012597比值超過正常范圍,基因呈上調(diào)表觀。BC087036在此用藥狀態(tài)下首次發(fā)生變化,下調(diào)到正常范圍之下。NM_001004085、NM_017075比值仍在正常范圍,未再出現(xiàn)有意義變化。
　　 5兩倍劑量(120mg/kg/day)用藥3天有意義基因表達變

9、化情況AF021348、NM_017075比值超過正常范圍,基因呈上調(diào)變化。NM_012597、BC087036、NM_001004085比值在正常范圍。
　　 6兩倍劑量(120mg/kg/day)用藥10天有意義基因表達變化情況NM_017075比值仍在正常范圍之上,但上調(diào)幅度較兩倍劑量用藥3天有所下降,與一倍劑量用藥10天比較其處于上調(diào)變化。其余四個基因AF021348、NM_012597、BC087036、NM_0010

10、04085比值皆在正常范圍。
　　 7兩倍劑量(120mg/kg/day)用藥20天有意義基因表達變化情況所有五個基因AF021348、NM_012597、NM_017075、BC087036、NM_001004085比值皆在正常范圍,無上調(diào)、下調(diào)變化。
　　 8兩倍劑量(120mg/kg/day)用藥10天停藥10天有意義基因表達變化情況所有五個基因AF021348、NM_012597、NM_017075、BC0870

11、36、NM_001004085繼續(xù)保持穩(wěn)定,無上調(diào)、下調(diào)變化。
　　 9四倍劑量(240mg/kg/day)用藥3天有意義基因表達變化情況NM_012597比值明顯降低,基因下調(diào)明顯,是該基因所有觀察組中首次下調(diào)且下調(diào)幅度較大。NM_017075比值明顯升高,基因上調(diào)明顯。其余三個基因AF021348、BC087036、NM_001004085比值在正常范圍,無上調(diào)、下調(diào)變化。
　　 10四倍劑量(2400mg/kg/d

12、ay)用藥10天有意義基因表達變化情況NM_017075比值仍在正常范圍之上,基因繼續(xù)保持上調(diào)變化,但上調(diào)幅度較四倍劑量用藥3天時降低。其余四個基因AF021348、NM_012597、BC087036、NM_001004085比值在正常范圍,無上調(diào)、下調(diào)變化。
　　 11四倍劑量(240mg/kg/day)用藥20天有意義基因表達變化情況所有觀察的五個基因AF021348、NM_012597、NM_017075、BC08703

13、6、NM_001004085在此用藥劑量和時間點,比值在正常范圍,無基因上調(diào)、下調(diào)變化。
　　 12四倍劑量(240mg/kg/day)用藥10天停藥10天有意義基因表達變化情況所有觀察的五個基因AF021348、NM_012597、NM_017075、BC087036、NM_001004085比值仍在正常范圍,基因表達穩(wěn)定。
　　 結(jié)論:大鼠口服丁苯酞后,通過rat384芯片可以觀察到肝臟在不同用藥劑量、不同用藥時間點

14、眾多基因上調(diào)或下調(diào)的變化。從中研究與甘油三酯代謝相關(guān)的有意義基因5個,得出其在不同劑量、多個時間點變化表達對甘油三酯代謝的影響和在各個用藥階段某些藥物、疾病、機體功能狀態(tài)等對基因表達產(chǎn)物的影響。
　　 丁苯酞一倍劑量應(yīng)用早期,NM_017075基因上調(diào)而其余四個基因保持穩(wěn)定,肝臟生酮作用和肝外解酮作用增強,有利于降低甘油三酯。后期AF021348、NM_012597基因上調(diào),甘油三酯生成和降解相互作用;且伴有:BC087036基