人孤獨癥相關基因NRXN1β啟動子區(qū)相關功能初步分析.pdf

1、目的：定義NRXN1β基因的最小啟動子區(qū)和調節(jié)基因轉錄的功能元件。
　　方法：首先通過構建含有NRXN1β基因上游調控區(qū)不同區(qū)域基因組序列的熒光素酶報告基因質粒，利用雙熒光素酶報告基因實驗檢測報告基因的轉錄活性以確定 NRXN1β基因最小啟動子區(qū)域，再進一步篩選出相應的顯著增強或抑制報告基因活性的功能區(qū)；然后利用基因定點突變技術對功能區(qū)內和功能區(qū)臨近DNA序列進行連續(xù)的堿基突變，并分析這些突變對報告基因活性的作用；最后結合在線轉錄

2、因子預測軟件PROMO，對功能區(qū)內的轉錄調控位元件進行初步分析。
　　結果：成功構建了含有不同啟動子區(qū)域和含有突變的兩個系列的NRXN1β啟動子-熒光素酶報告基因，相對熒光素酶活性結果顯示p4NRXN1β-88/+668（9.63±1.46）與p4NRXN1β-73/+668（2.08±0.51）相比、p4NRXN1β-106/+156（27.07±3.90）與 p4NRXN1β-106/+149（4.99±0.79）相比、p4N

3、RXN1β-106/+229（25.20±4.67）與p4NRXN1β-106/+419（12.53±1.51）相比，3組數(shù)據(jù)前者的熒光素酶活性都高于后者，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；為了評估-88/-73功能區(qū)及臨近堿基，利用基因定點突變技術成功構建了一系列的含有突變堿基的質粒，雙熒光素酶報告基因實驗檢測結果發(fā)現(xiàn)，-84/-63區(qū)域內突變的質粒與未突變相比活性降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），應用生物信息學技術對該區(qū)域內可