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文檔簡介
1、目的:定義NRXN1β基因的最小啟動子區(qū)和調節(jié)基因轉錄的功能元件。
方法:首先通過構建含有NRXN1β基因上游調控區(qū)不同區(qū)域基因組序列的熒光素酶報告基因質粒,利用雙熒光素酶報告基因實驗檢測報告基因的轉錄活性以確定 NRXN1β基因最小啟動子區(qū)域,再進一步篩選出相應的顯著增強或抑制報告基因活性的功能區(qū);然后利用基因定點突變技術對功能區(qū)內和功能區(qū)臨近DNA序列進行連續(xù)的堿基突變,并分析這些突變對報告基因活性的作用;最后結合在線轉錄
2、因子預測軟件PROMO,對功能區(qū)內的轉錄調控位元件進行初步分析。
結果:成功構建了含有不同啟動子區(qū)域和含有突變的兩個系列的NRXN1β啟動子-熒光素酶報告基因,相對熒光素酶活性結果顯示p4NRXN1β-88/+668(9.63±1.46)與p4NRXN1β-73/+668(2.08±0.51)相比、p4NRXN1β-106/+156(27.07±3.90)與 p4NRXN1β-106/+149(4.99±0.79)相比、p4N
3、RXN1β-106/+229(25.20±4.67)與p4NRXN1β-106/+419(12.53±1.51)相比,3組數(shù)據(jù)前者的熒光素酶活性都高于后者,具有統(tǒng)計學差異(P<0.05);為了評估-88/-73功能區(qū)及臨近堿基,利用基因定點突變技術成功構建了一系列的含有突變堿基的質粒,雙熒光素酶報告基因實驗檢測結果發(fā)現(xiàn),-84/-63區(qū)域內突變的質粒與未突變相比活性降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),應用生物信息學技術對該區(qū)域內可
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