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文檔簡介
1、PJ綜合征(Peutz-Jeghers syndrome)是一種常染色體顯性遺傳疾病。其疾病基因STK11(又稱為LKBl)于1998年被克隆,定位于19p13.3,包括10個外顯子,其中的9個為編碼區(qū),從端粒向著絲粒方向轉(zhuǎn)錄,基因所編碼的蛋白質(zhì)STKII是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。STKII參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞生長、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞極性、能量代謝等多種生理病理過程。STKII的表達(dá)豐度在個體發(fā)育的不同階段存在組織與時相差異性,提
2、示STKII的表達(dá)受到復(fù)雜而精密的調(diào)控。在轉(zhuǎn)錄水平對基因進(jìn)行調(diào)控在基因表達(dá)過程中有著重要的意義,但目前尚無有關(guān)其轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究的報道。 本實驗通過多種生物信息學(xué)軟件,預(yù)測人STKII可能的轉(zhuǎn)錄起始位點和重要的調(diào)控區(qū)域,結(jié)果提示:STKII基因的轉(zhuǎn)錄起始位點可能在-1194(以起始密碼子的第一個核苷酸為+1,下同),-1109亦為可能的候選轉(zhuǎn)錄起始位點,-1403~-900可能包含重要的調(diào)控序列。以此為基礎(chǔ),我們構(gòu)建了含人STK
3、II基因上游序列缺失片段的pGL3重組載體,瞬時轉(zhuǎn)染L-02、HeLa兩種細(xì)胞系,通過檢測熒光素酶活性分析缺失片段的啟動活性。結(jié)果顯示各缺失片段在兩株細(xì)胞均有啟動活性;當(dāng)3’端固定在-918,5’端由-1943~-1425的移位對啟動活性無明顯影響,提示-1943~-1425的區(qū)間內(nèi)不存在重要的順式作用元件;將5’端固定在-1943,隨著3’端向5’的縮短(-918→-1039→-1160),啟動活性明顯增強(qiáng)(活性pGL3-1943A>
4、pGL3-1943B>pGL3-1943C),提示-1160~-1039和-1039~-918的區(qū)間分別存在負(fù)性順式作用元件,同時提示核心啟動子的3’端位于-1160的5’末端,在pGL3-1322(-1322~-918)亦觀察到啟動活性,提示核心啟動子的5’端應(yīng)該位于-1322的3’末端,因此,人STK11的核心啟動子位于-1322~-1160之間,-1160~-1039和-1039~-918的區(qū)間存在負(fù)性順式作用元件。人STK11核
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