DETC在皮膚移植免疫排斥反應(yīng)中作用及機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：如何延長(zhǎng)異體皮膚移植物存活時(shí)間是燒傷創(chuàng)面修復(fù)領(lǐng)域中的主要問(wèn)題。而作為皮膚中抗原性最強(qiáng)的表皮組織是引發(fā)皮膚移植排斥反應(yīng)的關(guān)鍵部位。表皮組織主要由角盶細(xì)胞、郎格罕細(xì)胞(Langerhans cells，LCs)和樹(shù)突狀表皮內(nèi)T淋巴細(xì)胞(dentriticepidermal T lymohocytes,DETC)構(gòu)成。
　　傳統(tǒng)觀(guān)點(diǎn)認(rèn)為L(zhǎng)Cs是引發(fā)異體皮膚移植免疫排斥反應(yīng)的核心因素。但有觀(guān)點(diǎn)認(rèn)為L(zhǎng)Cs擁有免疫調(diào)節(jié)功能，而非普遍認(rèn)為

2、的強(qiáng)烈的免疫激活功能。通過(guò)LC敲除小鼠皮膚移植模型研究表明:與供受體都是野生型小鼠的皮膚移植相比，供體、受體以及供受體都缺乏LCs的小鼠之間的皮膚移植免疫排斥反應(yīng)的發(fā)生時(shí)間并沒(méi)有延長(zhǎng);說(shuō)明單純依靠LCs并不能直接引發(fā)皮膚移植免疫排斥反應(yīng)。提示我們除LCs外，在皮膚移植免疫排斥反應(yīng)中還可能存在其他的關(guān)鍵細(xì)胞參與。另外一種構(gòu)成表皮組織免疫微環(huán)境的重要細(xì)胞是DETC，即γδT細(xì)胞。γδT細(xì)胞優(yōu)先于αβT細(xì)胞出現(xiàn)，主要分布于小腸、肺、生殖器官及

3、皮膚等黏膜及皮下組，抗原識(shí)別無(wú)MHC限制性，其受體缺乏多樣性，只能識(shí)別共同抗原，γδT細(xì)胞識(shí)別抗原分子后，增殖分化為細(xì)胞毒性T細(xì)胞發(fā)揮生物學(xué)功能。γδT細(xì)胞被認(rèn)為是機(jī)體免疫體系的“初級(jí)防線(xiàn)”。有研究表明DETC具有促進(jìn)皮膚移植排斥反應(yīng)的發(fā)生的作用。并且人類(lèi)和小鼠外周血中的γδT細(xì)胞在激活后可同時(shí)表達(dá)高水平的共刺激分子如CD80/CD86等和MHCⅡ類(lèi)分子，并有效地處理并遞呈多肽抗原直接激活na(i)ve CD4+T細(xì)胞，表現(xiàn)出專(zhuān)職抗原遞

4、呈細(xì)胞的特性。而我們實(shí)驗(yàn)室前期的研究則表明外周循環(huán)中的γδT細(xì)胞以及皮膚組織中的DETC在激活后自發(fā)性高表達(dá)IFN-γ而不表達(dá)TGF-β。又有文獻(xiàn)表明異基因皮膚移植后供體DETC能夠通過(guò)淋巴引流進(jìn)入淋巴結(jié)，參與naive CD4+T細(xì)胞的激活分化過(guò)程。與αβT細(xì)胞不同，γδT細(xì)胞不需要專(zhuān)職抗原遞呈細(xì)胞(APCs)輔助，該細(xì)胞就能夠通過(guò)膜表面TCRγδ分子直接識(shí)別應(yīng)激性抗原、磷酸化抗原以及熱激蛋白的同源分子等多種形式的抗原，并被這些抗原激

5、活而分泌大量的IL2、TNFa，IFNγ等免疫激活因子。
　　以上信息提示我們DETC也具有類(lèi)似LC的功能，可直接啟動(dòng)皮膚移植排斥反應(yīng)。我們主要擬議通過(guò)MHC微小差異型皮膚移植模型及na(i)ve CD4+T細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)及抗體中和小鼠體內(nèi)IFN-γ后皮膚移植模型來(lái)初步研究DETC在皮膚移植免疫排斥反應(yīng)中的作用及機(jī)制。
　　內(nèi)容及方法：
　　1.建立同系MHC分子微小差異的不同性別C57 BL/6小鼠（雄-雌）之間的皮膚

6、移植，比較野生型(WT)組與基因敲除(GK)組移植皮片存活時(shí)間。
　　2.免疫熒光及流式細(xì)胞技術(shù)鑒定小鼠DETCs細(xì)胞表型、形態(tài)學(xué)特征及細(xì)胞表達(dá)情況。
　　3.通過(guò)na(i)ve CD4+T細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)及DETCs和na(i)ve CD4+T細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，觀(guān)察DETCs對(duì)淋巴細(xì)胞分化方向的影響。
　　4.建立小鼠皮膚移植模型，比較γ干擾素中和(IN)組與同行對(duì)照(C)組和GK組移植皮片存活時(shí)間。
　　5.通過(guò)C

7、onA對(duì)新鮮分離小鼠表皮細(xì)胞刺激與否，比較刺激組與對(duì)照組DETC表達(dá)IFN-γ情況。
　　結(jié)果：
　　1.基因敲除組小鼠移植皮片存活時(shí)間為22～35 d，較野生型組的12～16 d明顯延長(zhǎng)(x2=14.1，P＜0.01)。
　　2.小鼠表皮細(xì)胞中DETCs陽(yáng)性表達(dá)率為7.27％。且DETCs均為CD3+表型細(xì)胞，呈樹(shù)突狀散在分布在皮膚表皮中。
　　3.DETCs體外與na(i)ve CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)可以誘導(dǎo)該

8、型T細(xì)胞向Th1方向分化。
　　4.IFN-γ中和組小鼠移植皮片存活時(shí)間為19～24d，較同型對(duì)照組的12～16 d明顯延長(zhǎng)(x2=13.6，P＜0.001)，但與基因敲除組小鼠移植皮片存活時(shí)間無(wú)差異(x2=0.06，P=0.81)。
　　5.刺激組與對(duì)照組小鼠表皮細(xì)胞中DETC IFN-γ表達(dá)率分別為22.7％和0.51％。
　　結(jié)論：
　　DETC在C57BL/6小鼠MHC分子微小差異的不同性別小鼠（雄-雌）