大黃素抗大鼠肝移植排斥反應(yīng)作用及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的： 建立大鼠原位肝移植動(dòng)物模型；以近交系Lewis→Brown Norway(BN)肝移植大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究大黃素對(duì)大鼠肝移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)的作用和機(jī)理，以及大黃素與環(huán)孢素A合用對(duì)大鼠肝移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)的作用。 方法： 方法一：選取健康雄性封閉群Sprague-Dawley(SD)大鼠80對(duì)，其中60對(duì)大鼠用于練習(xí)建立SD→SD原位肝移植(OLT)模型，20對(duì)用于鞏固和評(píng)估手術(shù)操作，以及術(shù)后觀察肝移植

2、大鼠相關(guān)變化和標(biāo)本采集練習(xí)。 方法二：建立Lewis→BN大鼠原位肝移植模型，術(shù)后隨機(jī)分為4組：生理鹽水對(duì)照組(生理鹽水1ml·d-1)、CsA組(CsA10.0mg·kg-1·d-1)、大黃素組(大黃素50.0 mg·kg-1·d-1)、大黃素+CsA(大黃素50.0 mg·kg-1·d-1+CsA10.0mg·kg-1·d-1)，每組12只，術(shù)后腹腔內(nèi)注射藥物。各組隨機(jī)取6只大鼠，于術(shù)后第7天麻醉后處死，取移植肝組織病理標(biāo)本

3、，根據(jù)Banff分級(jí)方案觀察急性排斥活動(dòng)指數(shù)和Tunel法檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡；剩余大鼠觀察存活時(shí)間。 方法三：以近交系Lewis和BN大鼠建立大鼠OLT動(dòng)物模型，動(dòng)物隨機(jī)分為3組：同基因?qū)φ战M(BN→BN，生理鹽水1ml·d-1)，急性排斥組(Lewis→BN，生理鹽水1ml·d-1)，大黃素干預(yù)組(Lewis→BN，大黃素50mg·kg-1·d-1)，每組建模16只，術(shù)后腹腔內(nèi)注射藥物。每組隨機(jī)取6只大鼠，分別于給藥后第1d、3d

4、、5d、7d經(jīng)斷尾取血得血清0.2ml，檢測(cè)血清TNF-α、IL-12和IL-10水平變化；并于第7d處死，取移植肝病理組織標(biāo)本，觀察急性排斥活動(dòng)指數(shù)；其余10只用于觀察動(dòng)物體重及生存時(shí)間等變化。 結(jié)果： 結(jié)果一：經(jīng)熟練手術(shù)操作后，20對(duì)SD→SD原位肝移植大鼠術(shù)后24h、48h存活率均為90.0％，術(shù)后3天存活率為85.5％；術(shù)后存活超過(guò)3天的大鼠，除2只分別于術(shù)后第16、17天死亡外，其余均長(zhǎng)期存活，死亡大鼠尸檢顯示

5、肝內(nèi)大量膽汁淤積、沉淀；肝移植大鼠術(shù)后體重呈現(xiàn)逐漸下降，后緩慢回升；斷尾取血經(jīng)離心可得0.3-0.4ml左右血清。 結(jié)果二：以L(fǎng)ewis→BN大鼠肝移植為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，生理鹽水組大鼠的中位生存時(shí)間為12.5d，CsA組為23d，大黃素組為22d，大黃素+CsA組為33d；各組RAI值：生理鹽水組為7.67±0.98，CsA組5.17±0.40，大黃素組5.83±0.75，大黃素+CsA組3.83±0.75；各組AI值：生理鹽水組為3

6、5.83±2.32，CsA組15.83±1.33，大黃素組16.50±2.35，大黃素+CsA組11.50±1.05。四組中位生存時(shí)間、RAI值以及AI值分別兩兩比較，CSA組、大黃素組分別與生理鹽水組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；大黃素+CsA組分別與CsA組、大黃素組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CsA組和大黃素組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 結(jié)果三：各組近交系肝移植大鼠，同基因?qū)φ战M中位生存期為44.22d，排斥組為10.

7、9d，大黃素組為25.6d；排斥組中位生存期與對(duì)照組和大黃素組分別比較，P值均小于0.001。與對(duì)照組相比，排斥組大鼠術(shù)后外周血中各細(xì)胞因子水平均有上升，兩組差異IL-12、IL-10自術(shù)后第1天起即有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，TNF-α在術(shù)后第5天開(kāi)始差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；大黃素組與排斥組比較，TNF-α和IL-12含量有顯著下降，IL-10水平較排斥組升高，兩組間比較除TNF-α自術(shù)后第1天開(kāi)始差異即有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余均在術(shù)后第3天開(kāi)始表現(xiàn)出明顯統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)差別。移植肝臟病理切片經(jīng)HE染色后發(fā)現(xiàn)，排斥組急性排斥反應(yīng)指數(shù)(RAI)值為7.67±0.82，與對(duì)照組的1.33±0.52比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)；大黃素組RAI值為4.67±0.82，與排斥組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。 結(jié)論： 大鼠原位肝移植模型是一種技術(shù)成熟的動(dòng)物模型；大黃素能有效抑制近交系大鼠Lewis→BN肝移植急性排斥反應(yīng)，延長(zhǎng)受體大鼠術(shù)后生存時(shí)間，降低移植肝的急性排斥反應(yīng)