乳腺癌不同表型循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)及其臨床意義.pdf

1、背景:乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，其作為一種全身性疾病，腫瘤發(fā)展早期即可發(fā)生遠(yuǎn)處播散轉(zhuǎn)移，而復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移為導(dǎo)致乳腺癌患者死亡的主要原因。存在于外周血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)，在乳腺癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移中起到重要作用。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)可使部分腫瘤細(xì)胞上皮標(biāo)志表達(dá)下調(diào)，間質(zhì)標(biāo)志表達(dá)上調(diào)，使之具有間質(zhì)細(xì)胞特性，其在CTCs的產(chǎn)生、存活，并最終導(dǎo)致轉(zhuǎn)移灶的形成方面具有重要作用。CTCs依據(jù)其標(biāo)志表達(dá)情況可分為上皮型CTCs、間質(zhì)型CTCs及上

2、皮間質(zhì)混合型CTCs，同時(shí)有部分CTCs(3個(gè)或3個(gè)以上)聚集成團(tuán)，形成循環(huán)腫瘤細(xì)胞團(tuán)(CTM)?；A(chǔ)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，間質(zhì)型CTCs和CTM具有更強(qiáng)的轉(zhuǎn)移潛能。乳腺癌患者中各種類(lèi)型CTCs比例及各類(lèi)型與乳腺癌原發(fā)病理特征的關(guān)系尚不明確，本研究將對(duì)以上問(wèn)題進(jìn)行探討。
　　目的:研究乳腺癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的水平及各表型數(shù)目與乳腺癌原發(fā)腫瘤臨床病理特征的關(guān)系。
　　方法:71例乳腺癌患者及10例乳腺纖維腺瘤患者在首次住院時(shí)

3、抽取靜脈血10ml，首先紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，免疫磁珠陰性分離法去除白細(xì)胞，之后聚碳酸酯膜截留循環(huán)腫瘤細(xì)胞，最后采用多重RNA原位雜交技術(shù)進(jìn)行循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)。用免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織中雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、人表皮生長(zhǎng)因子（HER-2）和Ki-67表達(dá)情況。研究CTCs乳腺癌CTCs水平及各表型計(jì)數(shù)與患者發(fā)病年齡、腫瘤分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與否、ER、PR、HER-2、Ki-67狀態(tài)及乳腺癌分子分型的關(guān)系。
　　結(jié)

4、果:
　　1、共有71例浸潤(rùn)性乳腺癌患者納入本研究，其中61例患者10ml外周血中檢出CTCs，總陽(yáng)性率為85.9％(61/71)，各型CTCs中位數(shù)分別為:上皮型1個(gè)，間質(zhì)型2個(gè)，上皮間質(zhì)混合型2個(gè);有1例乳腺癌轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者檢測(cè)到1個(gè)由3個(gè)間質(zhì)型CTCs組成的CTM。對(duì)照組10例乳腺纖維腺瘤患者均未檢出CTCs。
　　2、共有Ⅰ+Ⅱ期患者25例，Ⅲ期患者18例，2例Ⅳ期患者及26例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者（復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組）納入

5、本研究，各期總檢出率分別為76％(16/25)、94.44％(17/18)、100％(28/28)。Ⅰ+Ⅱ期患者檢出CTCs中位計(jì)數(shù)分別為:上皮型1個(gè)，間質(zhì)型0.5個(gè)，上皮間質(zhì)混合型1個(gè);Ⅲ期患者檢出CTCs中位計(jì)數(shù)分別為:上皮型1個(gè)，間質(zhì)型3個(gè)，上皮間質(zhì)混合型2個(gè);復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌組患者檢出CTCs中位計(jì)數(shù)分別為:上皮型1個(gè)，間質(zhì)型3個(gè)，上皮間質(zhì)混合型5.5個(gè)。各腫瘤分期組CTCs水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），各腫瘤分期組

6、間質(zhì)型CTCs計(jì)數(shù)及上皮間質(zhì)混合型CTCs計(jì)數(shù)也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P*=0.002，P**＜0.001）。28例轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者CTCs水平、間質(zhì)型CTCs計(jì)數(shù)、上皮間質(zhì)混合型CTCs計(jì)數(shù)高于非復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P*＜0.001，P**=0.006，P***＜0.001）。
　　3、71例患者乳腺癌組織的免疫組化結(jié)果顯示:ER陽(yáng)性47例，ER陰性24例;PR高表達(dá)（≥20％陽(yáng)性）35例，PR患者

7、低表達(dá)（＜20％陽(yáng)性或陰性）36例;HER-2陽(yáng)性24例，HER-2陰性47例;Ki-67高表達(dá)（≥14％）60例，Ki-67低表達(dá)(＜14％)11例。ER陽(yáng)性組與ER陰性組及PR高表達(dá)與PR低表達(dá)組CTCs計(jì)數(shù)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P*=0.007，P**=0.002），HER-2陽(yáng)性組與HER-2陰性組及Ki-67高表達(dá)組及Ki-67低表達(dá)組CTCs計(jì)數(shù)水平差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P*=0.115，P*=0.477)。
　　4、7

8、1例乳腺癌患者中，Luminal A型、Luminal B型、HER-2過(guò)表達(dá)型和TNBC患者分別占8例(11.3％)、39例(55.0％)、11例(15.5％)、13例(18.3％)，其中Luminal B型中HER-2陽(yáng)性型13例(18.3％)，HER-2陰性型26例(36.7％);不同分子分型的乳腺癌患者CTCs計(jì)數(shù)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.049)，不同分子分型的乳腺癌患者間質(zhì)型CTCs計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002）

9、。HER-2過(guò)表達(dá)型及TNBC組患者CTCs水平及間質(zhì)型CTCs計(jì)數(shù)高于Luminal A型及Luminal B型組患者。
　　結(jié)論:
　　1、本研究采用的免疫磁珠法及膜濾過(guò)法兩種方法聯(lián)合對(duì)CTCs進(jìn)行富集，并利用多重雙色RNA-原位雜交技術(shù)檢測(cè)CTCs，可以對(duì)包括CTM在內(nèi)的所有的CTCs進(jìn)行分離，并進(jìn)行全面分型，具有極高的靈敏性及特異性，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　2、CTCs水平與乳腺癌的臨床分期密切相關(guān)，分期