原發(fā)性乳腺癌患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞的檢測(cè)及臨床意義.pdf

1、目的:本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)原發(fā)性乳腺癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞的檢測(cè),探討循環(huán)腫瘤細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞與乳腺癌臨床、病理特征的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1：采集44例初治原發(fā)性乳腺癌患者10 ml外周血,制備外周血單個(gè)核細(xì)胞懸液(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。另取15例正常女性志愿者10 ml外周血作為對(duì)照組。
　　 2：外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)標(biāo)記細(xì)胞角蛋

2、白(cytokeratin,CK)19單克隆抗體,以CK19作為外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的標(biāo)記物。
　　 3：免疫磁性激活細(xì)胞分選(Magnetic-activated cell sorting,MACS)陽(yáng)性分選(positive selection strategy)獲得CK19陽(yáng)性循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)。
　　 4：將提取的陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光抗體雙染色,標(biāo)記鼠抗人單克隆抗體CD44、鼠抗人單克隆抗體CD24,以CD44

3、+/CD24-/low作為腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志。
　　 5：免疫熒光顯微鏡檢測(cè)表達(dá)CD44+/CD24-/low的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)含里。
　　 6：所得結(jié)果用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1：15例正常女性志愿者PBMC中未檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞。44例原發(fā)性乳腺癌患者PBMC檢測(cè)結(jié)果:33例(75.00％)患者PBMC中檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞。兩組通過(guò)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

4、P＜0.05)。
　　 2：44例原發(fā)性乳腺癌患者按臨床分期分為3組:Ⅰ期患者12例,5例外周血中檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞(41.67％);Ⅱ期患者18例,15例外周血中檢測(cè)到CKl9陽(yáng)性細(xì)胞(83.33％);Ⅲ期患者14例,13例外周血中檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞(92.86％)。X2檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3：按淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分為兩組:No24例,15例檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞(62.50％);N1-32

5、0例,18例檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞(90.00％)。X2檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4：33例CKl9陽(yáng)性樣本中21例(63.63％)檢測(cè)到CD44+/CD24-/low細(xì)胞。按臨床分期分為3組:Ⅰ期患者2例檢測(cè)到CD44+/CD24-/low細(xì)胞(215,40.00％);Ⅱ期患者10例檢測(cè)到CD44+/CD24-/low細(xì)胞(10/15,66.67％);Ⅲ期患者9例檢測(cè)到CD44+/CD24-/low細(xì)胞(9/

6、13,69.23％)。
　　 5：ER陽(yáng)性樣本33例,24例檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞(72.73％),15例檢測(cè)到CD44+/CD24-/low細(xì)胞(15/24,62.50％);ER陰性樣本11例,9例檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞(81.82％),6例檢測(cè)到CD44+/CD24-/low細(xì)胞(6/9,66.67％)。
　　 6：C-erbB2陽(yáng)性樣本6例,4例檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞(66.67％),2例檢測(cè)到CD44+/CD24

7、-/low細(xì)胞(2/4,50.00％);C-erbB2陰性樣本24例,16例檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞(66.67％),11例檢測(cè)到CD44+/CD24-/low細(xì)胞(11/16,68.75％)。
　　 7：可見(jiàn)脈管瘤栓樣本13例,9例檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞(69.23％),8例檢測(cè)到CD44+/CD24-/low細(xì)胞(8/9,88.89％);未見(jiàn)脈管瘤栓樣本31例,24例檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞(77.42％),13例檢測(cè)到CD44

8、+/CD24-/low細(xì)胞(13/24,54.17％)。
　　 8：根據(jù)分子亞型,將樣本分為三型:三陰乳腺癌(ER、PR陰性,C-erbB2經(jīng)FISH法檢測(cè)陰性)、ER陽(yáng)性(ER和/或PR陽(yáng)性)、C-erbB2陽(yáng)性(ER、PR陰性,C-erbB2經(jīng)FISH法檢測(cè)陽(yáng)性)。三陰樣本5例,5例檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞(100.00％),4例檢測(cè)到CD44+/CD24-/low細(xì)胞(4/5,80.00％);ER陽(yáng)性樣本19例,11例檢測(cè)到

9、CK19陽(yáng)性細(xì)胞(57.89％),7例檢測(cè)到CD44+/CD24-/low細(xì)胞(7/11,63.64％);C-erbB2陽(yáng)性樣本4例,3例檢測(cè)到CK19陽(yáng)性細(xì)胞(75.00％),2例檢測(cè)到CD44+/CD24-/lww細(xì)胞(2/3,66.67％)。
　　 結(jié)論:
　　 1：原發(fā)性乳腺癌患者外周血中可檢測(cè)到循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)及腫瘤干細(xì)胞(TSC)。
　　 2：循環(huán)腫瘤細(xì)胞的陽(yáng)性率與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),