尋找小分子物質穩(wěn)定角蛋白結構保護肝損傷的研究.pdf

1、慢性乙型肝炎、藥物性肝損害等其他多種因素可造成我國患者肝臟損傷，在肝損傷發(fā)生過程中患者個體之間差異較大，同種病因往往可導致完全不同的轉歸，因此其他潛在的造成這種個體差異的因素需要進一步探究。角蛋白是三大細胞骨架蛋白中間絲蛋白的最大亞群，它在肝細胞中與肝細胞結構、功能密切相關，特別是研究發(fā)現角蛋白基因突變可導致宿主容易造成肝臟損傷，因此它是否作為一種潛在因素影響著患者不同的轉歸，有待進一步研究。肝臟特異性角蛋白K18 R90C突變造成其結

2、構改變，使表達該類角蛋白的肝細胞變得脆弱且使宿主容易發(fā)生肝臟損傷。尋找能夠逆轉突變角蛋白結構的方法，從而恢復其結構功能，是保護及治療肝臟損傷的一種新方法。
　　目的:本研究希望能夠找到逆轉突變角蛋白結構的小分子物質，穩(wěn)定其突變結構，恢復角蛋白功能并為肝臟損傷提供保護，并研究相關小分子物質的保護機制，進一步闡述角蛋白結構改變的原因。本研究為肝臟損傷提供了新的治療前景，同時也為以肝損傷為代表的“中間絲蛋白相關疾病”的治療提供了新的方向

3、。并且本研究為將來進一步探究角蛋白是否與肝損傷個體差異有關，以及我國患者中角蛋白突變情況的研究提供了依據。
　　方法:本研究將通過以免疫熒光圖像為基礎的小分子藥物篩選方法，尋找能夠穩(wěn)定突變角蛋白結構的小分子物質，在突變細胞及轉基因小鼠中分別驗證該小分子的結構穩(wěn)定作用，并將之作為預防性藥物檢測其在突變細胞和小鼠中的肝損傷保護作用，并進一步通過免疫組化、免疫共沉淀以及重建實驗探究小分子物質的作用機制。
　　結果:PKC412是一

4、種多蛋白激酶抑制劑，本研究發(fā)現它能夠改變K18 R90C突變結構，在熒光顯微鏡下觀察發(fā)現它能使突變結構恢復到正常的細胞骨架蛋白結構。并且PKC412能夠為突變細胞及轉基因小鼠提供保護，與未經PKC412處理的細胞相比，其能夠減少細胞凋亡相關信號的表達，而與對照組小鼠相比，它能夠大大減少急性肝損傷的發(fā)生（PKC412處理小鼠平均血清ALT水平為266 U/L，而對照組小鼠平均ALT水平為6546 U/L，P＜0.05，且H&E染色表明PK

5、C412能夠減少小鼠急性肝損傷后肝臟出血）。本研究中還進一步探究了PKC412產生保護作用的機制，發(fā)現PKC412是通過改變非肌肉型肌球蛋白重鏈(NMHC)IIA的磷酸化程度，從而調節(jié)其與角蛋白之間的結合程度來改變突變角蛋白結構的，而研究中的重建實驗進一步表明，PKC412作為蛋白激酶抑制劑對NMHC-IIA的磷酸化改變而非對角蛋白的磷酸化改變是其發(fā)揮作用的關鍵。
　　結論:本文發(fā)現了多蛋白激酶抑制劑PKC412能夠逆轉突變角蛋白