MMR蛋白在雌激素致結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡中的作用及SEPT9檢測結(jié)直腸癌的研究.pdf

1、背景與目的:
　　近30年來，我國結(jié)直腸癌的發(fā)生率和死亡率呈明顯上升趨勢，結(jié)直腸癌已成為我國的重大公眾衛(wèi)生問題。隨著我國腫瘤防治戰(zhàn)略的整體前移，通過預(yù)防和早診早治來降低結(jié)直腸癌的發(fā)生率和死亡率越來越受重視。
　　化學(xué)預(yù)防是一種較有前景的結(jié)直腸癌一級預(yù)防方法。流行病學(xué)研究表明，雌激素具有預(yù)防結(jié)直腸癌發(fā)生的作用，但雌激素預(yù)防結(jié)直腸癌的具體機(jī)制尚不明確，錯(cuò)配修復(fù)（mismatch repair, MMR）蛋白可能是其中較關(guān)鍵的因素

2、之一。本文第一部分研究了MMR蛋白在雌激素引起的結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡中的作用。
　　已有充足的證據(jù)表明，篩查和早期診斷能降低結(jié)直腸癌的死亡率。糞便隱血試驗(yàn)是目前最常用的結(jié)直腸癌篩查方法，但是其敏感性欠佳。外周血septin9基因甲基化檢測(SEPT9)是一種新的結(jié)直腸癌診斷標(biāo)志物，但尚未在國內(nèi)開展使用。本文第二部分研究了新一代SEPT9在中國人群中檢測結(jié)直腸腫瘤的性能，并與免疫糞隱血試驗(yàn)(fecalimmunochemical test

3、，F(xiàn)IT)進(jìn)行了比較。
　　方法:
　　我們使用了兩種MMR蛋白缺陷的人結(jié)腸癌細(xì)胞株:hMLH1缺陷的HCT116細(xì)胞，和hMSH2缺陷的LoVo細(xì)胞。通過轉(zhuǎn)染hMLH1和hMSH2野生型cDNA，又構(gòu)建了相應(yīng)的MMR蛋白正常的細(xì)胞株。在給予雌二醇(17β-estradiol，E2)處理后，觀察不同MMR狀態(tài)的細(xì)胞活性和凋亡率的改變，以及凋亡相關(guān)蛋白Bax，caspase-9和caspase-3表達(dá)的變化。同時(shí)，也研究了過表

4、達(dá)雌激素受體β(estrogen receptorβ，ERβ)蛋白對結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的影響。
　　選取經(jīng)結(jié)腸鏡檢查和病理確診的135例結(jié)直腸癌患者，169例腺瘤性息肉患者（包括84例進(jìn)展期腺瘤和85例非進(jìn)展期腺瘤），81例增生性息肉患者，和91例健康對照者（結(jié)腸鏡檢查未見異常）。所有476名患者均在結(jié)腸鏡檢查前抽取外周血，以Epi proColon2.0試劑盒行septin9基因甲基化檢測。其中177名患者同時(shí)接受了SEPT9和FI

5、T檢查。以結(jié)腸鏡檢查為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算SEPT9和FIT檢測結(jié)直腸腫瘤的敏感性和特異性，并以McNemar檢驗(yàn)比較SEPT9和FIT對結(jié)直腸癌和進(jìn)展期腺瘤的檢出率。
　　結(jié)果:
　　E2僅在hMLH1蛋白正常表達(dá)的結(jié)腸癌細(xì)胞中引起凋亡;而在hMLH1蛋白表達(dá)缺失的結(jié)腸癌細(xì)胞中，E2并不能引起明顯的凋亡反應(yīng)。過表達(dá)hMSH2或ERβ也能誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡，但這種效應(yīng)與E2處理無關(guān)。即使在hMSH2缺陷的LoVo細(xì)胞中，過表達(dá)hML

6、H1蛋白也增強(qiáng)了E2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡反應(yīng)。
　　SEPT9對結(jié)直腸癌的敏感性為74.8％(95％ CI:67.0％-81.6％)，特異性為87.4％（與非結(jié)直腸癌對比，95％ CI:83.5％-90.6％）。SEPT9總的假陽性率為4.7％(95％CI:2.2％-8.6％)。SEPT9對Ⅰ期結(jié)直腸癌的檢出率為66.7％，Ⅱ期為82.6％，Ⅲ期為84.1％，Ⅳ期為100％。SEPT9對進(jìn)展期腺瘤的敏感性為27.4％（95％ CI:18

7、.7％-37.6％）。FIT對結(jié)直腸癌的敏感性為58.0％（95％ CI:46.1％-69.2％），特異性為82.4％(95％ CI:74.4％-88.7％)。69例同時(shí)接受SEPT9和FIT檢查的結(jié)直腸癌患者中，SEPT9檢測出了25例FIT為陰性的結(jié)直腸癌，而FIT檢測出了12例SEPT9為陰性的結(jié)直腸癌。SEPT9對結(jié)直腸癌的檢測性能優(yōu)于FIT，但是對進(jìn)展期腺瘤的檢出率與FIT相似。
　　結(jié)論:
　　E2導(dǎo)致的結(jié)腸癌凋

8、亡是依賴于錯(cuò)配修復(fù)蛋白hMLH1的，hMLH1蛋白能增強(qiáng)E2誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡，但這一過程可能獨(dú)立于錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的錯(cuò)配識別和修復(fù)能力。該結(jié)果提示，在接受雌激素替代治療前、或使用雌激素類似物預(yù)防結(jié)直腸癌前，應(yīng)該評估患者錯(cuò)配修復(fù)蛋白狀態(tài)，以使效益/風(fēng)險(xiǎn)比最大化。
　　SEPT9檢測結(jié)直腸癌的敏感性和特異性均高于FIT，可用于結(jié)直腸癌的篩查和早期診斷。但其對進(jìn)展期腺瘤的敏感性較差。SEPT9和FIT兩種方法在檢測結(jié)直腸癌上具有互補(bǔ)性，