人結(jié)腸癌細胞中雌激素受體β與mTOR基因相互作用的初步研究.pdf

1、背景與目的：
　　 近年來研究發(fā)現(xiàn)，雌激素受體β（Erβ）在人結(jié)直腸癌組織中的表達較周圍正常組織明顯下降，在結(jié)直腸癌的發(fā)生中起保護作用。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)介導的信號傳導通路是與細胞增殖和凋亡密切相關的通路之一，在結(jié)直腸癌中有mTOR的高表達和過度活化。此外，DNA甲基化異常是腫瘤發(fā)生早期的重要表觀遺傳改變，與人結(jié)直腸癌的發(fā)生密切相關，抑制DNA甲基化酶

2、可使抑癌基因的啟動子去甲基而活化，從而抑制腫瘤生長。本研究旨在初步探討在結(jié)腸癌細胞中Erβ與mTOR 兩者之間是否存在交互作用，以期為結(jié)腸癌的防治提供新的線索。
　　 方法：對人結(jié)腸癌細胞HCT116 和SW480 分別進行以下三種處理：（1）Erβ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染（2）采用小分子RNA（siRNA）干擾人結(jié)腸癌細胞中的mTOR基因（3）以去甲基化藥物5-氮脫氧胞苷（5-aza-dC）處理人結(jié)腸癌細胞。采用Real-time PCR 方

3、法檢測各處理細胞組中mTOR、Erβ、cyclinD1 和P21 的mRNA表達，并通過蛋白質(zhì)印跡法檢測mTOR、p-mTOR、Erβ、cyclinD1和P21的蛋白表達水平。
　　 結(jié)果：
　　 （1）人結(jié)腸癌細胞HCT116 和SW480 中Erβ基礎表達量極低, Erβ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后, Erβ基因及蛋白的表達水平均顯著升高；p-mTOR 及cyclinD1 蛋白表達均明顯下降; P21 蛋白表達升高；mTOR 蛋白的表

4、達水平在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后無明顯變化。
　　 （2）經(jīng)Real-time PCR 及蛋白印跡法鑒定，mTOR siRNA 能有效下調(diào)HCT116 細胞株中mTOR 的基因及相應蛋白的表達；同時Erβ和P21的基因及蛋白的表達水平上調(diào)，而cyclinD1 的基因及蛋白表達水平下降；但是，SW480 細胞對高濃度的siRNA 干擾卻無明顯應答。
　　 （3）5-氮脫氧胞苷（5-aza-dC）分別處理HCT116和SW480細胞后，

5、Erβ及P21的基因及蛋白表達水平均提高; p-mTOR及cyclinD1的蛋白表達水平下降; mTOR的表達水平在處理前后無明顯變化。
　　 結(jié)論：Erβ和mTOR之間具有負性調(diào)節(jié)的作用：過度表達Erβ，能抑制mTOR蛋白的磷酸化；相反，抑制mTOR 表達的同時能上調(diào)Erβ的表達。兩種方式都能顯著降低cyclinD1 的表達，抑制腫瘤細胞的增殖。從而為Erβ及其特異性激動劑和mTOR 抑制劑在防治結(jié)腸腫瘤中的聯(lián)合應用提供了初步