腦缺血再灌注大鼠PDCd-5的表達(dá)及依達(dá)拉奉干預(yù)后對(duì)其的影響.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)采用SD(Sprague Dawley)大鼠腦缺血再灌注模型，并從形態(tài)學(xué)水平、分子水平及藥物干預(yù)等方面進(jìn)行研究，檢測(cè)腦缺血再灌注大鼠海馬組織中PDCD-5和Caspase-3的表達(dá)變化，并觀察依達(dá)拉奉對(duì)缺血再灌注大鼠的海馬組織中細(xì)胞凋亡的影響及PDCD-5和Caspase-3的表達(dá)的影響，探討依達(dá)拉奉是否能通過(guò)抑制PDCD-5的表達(dá)而抑制細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮腦保護(hù)作用。
　　方法:
　　選擇10-12周

2、齡，體重約250g-300g的清潔級(jí)雄性健康SD大鼠80只，隨機(jī)分為:空白對(duì)照組(n=8)，假手術(shù)組(n=24)，腦缺血再灌注(cerebralischemia/reperfusion，I/R)組(n=24)及藥物干預(yù)組(n=24)四個(gè)組。又將腦缺血再灌注組和依達(dá)拉奉藥物干預(yù)組隨機(jī)分為4個(gè)亞組，分別是:6h組、1d組、3d組、7d組，每個(gè)亞組6只大鼠。選擇Longa法結(jié)合后人的改良方案，建立SD大鼠大腦中動(dòng)脈缺血2小時(shí)后再灌注模型，造模

3、后選擇動(dòng)物行為學(xué)評(píng)分法來(lái)評(píng)價(jià)SD大鼠的神經(jīng)功能缺損情況，運(yùn)用HE染色觀察海馬病理形態(tài)，運(yùn)用TTC染色觀察腦梗死的面積百分比，運(yùn)用TUNEL法檢測(cè)不同時(shí)期細(xì)胞凋亡的變化，采用Western blot方法檢測(cè)不同時(shí)期海馬組織中PDCD-5和Caspase-3蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1.神經(jīng)功能缺損評(píng)分:空白對(duì)照組和假手術(shù)組的神經(jīng)功能缺損評(píng)分均為0分，腦缺血再灌注組（I/R組）和藥物干預(yù)組0-4分的神經(jīng)功能缺損評(píng)分均有，

4、0分及4分的大鼠已被剔除，從同批次的大鼠中隨機(jī)補(bǔ)充，藥物干預(yù)組的的神經(jīng)功能缺損評(píng)分（實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)）與腦缺血再灌注組比較明顯減少，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.HE染色結(jié)果:在空白對(duì)照組和假手術(shù)組，可見(jiàn)SD大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整，邊界清晰，未見(jiàn)間質(zhì)水腫，沒(méi)有明顯梗塞灶。而在腦缺血再灌注組，可見(jiàn)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞產(chǎn)生壞死，有明顯的數(shù)量減少，藥物干預(yù)組與腦缺血再灌注組比較，可見(jiàn)相對(duì)較多的神經(jīng)元，結(jié)構(gòu)稍清晰，腦組

5、織損傷程度明顯減輕。
　　3.TTC染色:空白對(duì)照組與假手術(shù)組未見(jiàn)梗死灶，腦缺血再灌注組與藥物干預(yù)組均可見(jiàn)明顯的梗死灶，而且藥物干預(yù)組腦梗死的面積百分比與腦缺血再灌注組比較明顯減少，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡:空白對(duì)照組及假手術(shù)組有少量的細(xì)胞凋亡，在腦缺血再灌注組中，凋亡細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)在6h時(shí)開(kāi)始升高，3d時(shí)達(dá)到峰值，之后逐漸下降，但所有亞組仍比假手術(shù)組和空白對(duì)照組高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、意(P＜0.05)。在藥物干預(yù)組中，凋亡細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)的變化趨勢(shì)與I/R組一致，同樣在6h時(shí)開(kāi)始升高，3d時(shí)達(dá)到峰值，之后逐漸下降，所有亞組與腦缺血再灌注組對(duì)應(yīng)的亞組比較凋亡細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)均減少，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.Western blot檢測(cè)結(jié)果:在空白對(duì)照組和假手術(shù)組中大鼠的海馬CA1區(qū)，可檢測(cè)到PDCD-5和Caspase-3蛋白的表達(dá)，在腦缺血再灌注組中PDCD-5蛋白及Caspase-3蛋白在6h時(shí)開(kāi)

7、始升高，3d時(shí)達(dá)到峰值，之后逐漸下降，但所有亞組仍比假手術(shù)組和空白對(duì)照組高，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P＜0.05)。在藥物干預(yù)組中PDCD-5及Caspase-3的表達(dá)趨勢(shì)與I/R組相差無(wú)幾，同樣在6h時(shí)開(kāi)始升高，3d時(shí)達(dá)到峰值，之后逐漸下降，所有亞組與腦缺血再灌注組對(duì)應(yīng)的亞組比較PDCD-5及Caspase-3的表達(dá)明顯減少，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.SD大鼠腦缺血再灌注損傷后海馬組織中PDC