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1、目的:三葉青(Tetrastigmatishemsleyani)為葡萄科崖爬藤屬植物三葉崖爬藤(TetrastigmahemsleyanumDielsetGilg)?,F(xiàn)代藥理研究表明,三葉青具有較好的抗腫瘤活性。但有關(guān)三葉青抗腫瘤活性成分的報(bào)道甚少,且抗腫瘤作用的物質(zhì)基礎(chǔ)尚不十分清楚?;诖?,本課題擬以藥理活性為指導(dǎo),篩選三葉青抗腫瘤的活性部位,對(duì)其活性部位進(jìn)行分離純化研究,進(jìn)而篩選其活性成分,并鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。為闡述三葉青抗腫瘤活性機(jī)
2、理提供一定的科學(xué)依據(jù)。
方法:本課題以系統(tǒng)溶劑萃取法對(duì)三葉青乙醇提取物進(jìn)行依次萃取,得到各個(gè)萃取部位,進(jìn)而采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法,以MB-435s細(xì)胞為受試對(duì)象,篩選其活性部位。然后通過(guò)硅膠柱色譜、SephadexLH-20色譜、中低壓制備LC色譜、制備HPLC色譜、HPLC色譜和大孔樹(shù)脂等分離純化方法,對(duì)三葉青的抗腫瘤活性部位進(jìn)行系統(tǒng)的植化分離,得到各個(gè)單體化合物。最后采用體外細(xì)胞試驗(yàn)(MTT法)對(duì)分離得到各個(gè)單體化
3、合物進(jìn)行抗腫瘤活性篩選,找到具有抗腫瘤作用的活性成分。
結(jié)果:體外細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果顯示乙醚部位和水部位具有一定的抗腫瘤活性,IC50分別為99.7μg/mL和127.8μg/mL,其藥效與藥物濃度呈正相關(guān)作用。然后對(duì)三葉青的抗腫瘤活性部位之一,即乙醚部位,進(jìn)行系統(tǒng)的植化分離,分離鑒定了10個(gè)單體化合物,分別為:β-谷甾醇(D1)、棕櫚酸(D2)、原兒茶酸(D3)、白藜蘆醇(D4)、山奈酚(D5)、槲皮素(D6)、對(duì)羥基苯甲酸(D7
4、)、水楊酸(D8)、4-羥基肉桂酸(D9)、異槲皮苷(D10)。接著對(duì)以上10個(gè)化合物進(jìn)行抗腫瘤活性篩選,得到2個(gè)具有明顯抗腫瘤活性的化合物,分別為白藜蘆醇(D4)和山奈酚(D5),其對(duì)應(yīng)的IC50分別為92.4μg/mL和294.2μg/mL。而對(duì)三葉青另一抗腫瘤活性部位,即水部位,采用大孔樹(shù)脂法和醇沉等分離方法,分離得到6個(gè)組分,即ZF1、ZF2、ZF3、ZF4、ZF5和ZF6。對(duì)這6個(gè)組分進(jìn)行活性篩選,獲得3個(gè)具有一定抗腫瘤活性的
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