異常高表達(dá)的Pim-3抑制胃癌細(xì)胞凋亡促進(jìn)胃癌發(fā)生發(fā)展的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、胃癌(Gastric carcinoma, GC)是起源于胃上皮的消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,嚴(yán)重危害了我國(guó)人民的健康。Pim-3是具有絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的原癌基因,Pim-3在內(nèi)胚層由來的肝癌、胰腺癌、胃癌組織中過度表達(dá),而在這些正常組織中不表達(dá)或者低表達(dá)。并且pim-3表達(dá)與性別、胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、靜脈侵犯有密切關(guān)系。已有研究顯示Pim-3在胰腺癌細(xì)胞株中,通過磷酸化凋亡蛋白分子Bad在112位點(diǎn)的絲氨酸,使其失活,釋放出抗凋亡蛋白

2、分子Bcl-XL,從而抑制胰腺癌細(xì)胞凋亡,促進(jìn)腫瘤形成。通過RNA干擾技術(shù)(Pim-3 shRNA)瞬時(shí)干擾胰腺癌細(xì)胞 Pim-3基因表達(dá),可以減弱凋亡分子Bad在112位絲氨酸的磷酸化水平,引起 SubG1期細(xì)胞數(shù)目增加和細(xì)胞周期遲緩,進(jìn)一步抑制細(xì)胞增殖。然而Pim-3在胃癌中的作用及其機(jī)制研究甚少,因此我們進(jìn)一步探討Pim-3在胃癌中作用的分子機(jī)制,為胃癌的靶向治療提供新的思路。
　　【目的】通過檢測(cè)胃癌與癌旁組織中Pim-3

3、 mRNA和蛋白來了解Pim-3在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)差異,通過RNAi技術(shù),敲除胃癌細(xì)胞中Pim-3,來探究Pim-3對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、周期、細(xì)胞凋亡以及動(dòng)物皮下腫瘤生長(zhǎng)的影響,闡明Pim-3在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用機(jī)制,為Pim-3作為胃癌生物靶向治療手段提供理論依據(jù)。
　　【方法】免疫組化檢測(cè)人胃癌組織標(biāo)本中Pim-3表達(dá);定量PCR檢測(cè)胃癌組織中的Pim-3 mRNA的表達(dá)水平;通過慢病毒感染建立穩(wěn)定干擾Pim-3的胃癌

4、細(xì)胞系;western blot檢測(cè)胃癌細(xì)胞系中Pim-3表達(dá)以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上相關(guān)分子的變化; CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡;克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌細(xì)胞克隆形成能力;動(dòng)物體內(nèi)異種移植瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞體內(nèi)成瘤情況。
　　【結(jié)果】1、胃癌組織中的Pim-3 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯高于癌旁組織。2、成功的構(gòu)建了穩(wěn)定敲除Pim-3的胃癌細(xì)胞株。3、敲除Pim-3能顯著抑制胃癌細(xì)胞的增殖、克隆形成、周期進(jìn)

5、程并促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。4、敲除Pim-3的胃癌細(xì)胞株在裸鼠皮下成瘤能力明顯小于對(duì)照組。5、敲除Pim-3后,胃癌細(xì)胞中的細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白分子Cdc25C, cyclin B1,phospho-p21T145, Bcl-XL和 P-Bad112的蛋白表達(dá)也降低。
　　【結(jié)論】胃癌中Pim-3過度表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞的增殖、周期進(jìn)程并且抑制細(xì)胞的凋亡,最終促進(jìn)了胃癌的發(fā)生發(fā)展,因此開發(fā)針對(duì)Pim-3的靶分子有望成為新的胃癌靶向治療