異常高表達(dá)CK1對肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生發(fā)展影響的研究.pdf

1、目的:探討異常高表達(dá)的CK1與肝細(xì)胞肝癌的發(fā)生、發(fā)展、腫瘤侵襲及預(yù)后的關(guān)系;探討CK1能否作為一種新的腫瘤標(biāo)志物參與腫瘤的血清學(xué)和病理學(xué)的診斷,能否成為肝癌靶向治療的標(biāo)靶。
　　實驗設(shè)計:通過雙向電泳、質(zhì)譜分析篩選出肝癌中特異性高表達(dá)的膜蛋白CK1;通過Westernblot,RT-PCR,免疫組化,免疫熒光染色和ELISA等方法明確CK1在人肝癌組織和血液中的表達(dá);研究CK1的異常表達(dá)與MVD的關(guān)系;通過轉(zhuǎn)染相應(yīng)siRNA抑制C

2、K1的表達(dá)后,應(yīng)用MTT及Transwell分別檢測轉(zhuǎn)染前后HepG2細(xì)胞的增值和侵襲能力的變化;應(yīng)用裸鼠成瘤實驗檢測CK1在體內(nèi)對腫瘤細(xì)胞增殖的影響。
　　結(jié)果:(1)雙向電泳及質(zhì)譜分析結(jié)果顯示相對于正常肝組織在肝癌中,膜蛋白CK1高表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)在肝細(xì)胞肝癌中有86.76％(59/68)的病人異常高表達(dá)CK1,免疫組化和免疫熒光證實CK1特異的表達(dá)在肝癌細(xì)胞膜上;而在非肝癌及肝硬化病人中僅有6.67%(1/15)陽性表達(dá)

3、;在mRNA水平,肝癌中CK1的表達(dá)量明顯高于正常肝。(2)ELISA證實在肝癌和非肝癌的病人中血清中CK1的表達(dá)沒有差異性。(3)在CK1陽性的肝癌中MVD的數(shù)量明顯高于CK1陰性表達(dá)的肝癌。(4)轉(zhuǎn)染CK1siRNA下調(diào)HepG2中CK1表達(dá)后,CK1mRNA和蛋白表達(dá)量較空白組和對照組均明顯下降。(5)HepG2在下調(diào)CK1后其增值和侵襲能力較空白組和對照組均明顯降低。(6)在實驗組裸鼠中降低CK1表達(dá)能抑制腫瘤的生長。