Celecoxib干預(yù)胃癌發(fā)生發(fā)展的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的] 該研究通過(guò)測(cè)定胃癌組織及癌旁組織中的COX-2(環(huán)氧化酶-2)的表達(dá)，及在celecoxib(COX-2抑制劑)的干預(yù)下，與胃癌發(fā)展密切相關(guān)的細(xì)胞增值及VEGF(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子)的表達(dá)，和裸鼠移植瘤模型實(shí)驗(yàn)，以探討環(huán)氧化酶-2、環(huán)氧化酶-2抑制劑與胃癌的關(guān)系。 [方法] 1.采用SP免疫組織化學(xué)法檢測(cè)胃癌組織及癌旁組織(胃癌組織按有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床病理分期即早期、進(jìn)展期，組織病理分期即高中分化、低未

2、分化三種標(biāo)準(zhǔn)分類(lèi))中的COX-2表達(dá)。 2.采用細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)celecoxib對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901和BGC823生長(zhǎng)曲線的影響。胃癌細(xì)胞SGC7901和BGC-823常規(guī)培養(yǎng)于含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，按計(jì)劃每日取兩塊24孔板計(jì)數(shù)，共8天。以培養(yǎng)時(shí)間為橫軸，細(xì)胞數(shù)對(duì)數(shù)為縱軸，繪制各藥物濃度干預(yù)后的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。 3.采用MTT比色法檢測(cè)celecoxib對(duì)SGC7901細(xì)胞和BGC-823存活率的影

3、響。胃癌細(xì)胞SGC7901和BGC-823常規(guī)培養(yǎng)于含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，對(duì)照組細(xì)胞存活率記為100％，實(shí)驗(yàn)組按下列公式計(jì)算細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率=實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值×100％。 4.ELISA(酶聯(lián)免疫吸附)法測(cè)定celecoxib對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901細(xì)胞和BGC823分泌釋放VEGF蛋白的影響。胃癌細(xì)胞SGC7901、BGC823常規(guī)培養(yǎng)于含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，待細(xì)胞貼

4、壁后加藥。設(shè)劑量—效應(yīng)關(guān)系組和時(shí)間—效應(yīng)關(guān)系組。4天后結(jié)束實(shí)驗(yàn)，提取細(xì)胞上清液。按ELISA試劑盒建立VEGF蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)450nm處OD值，由曲線得出VEGF蛋白濃度。 5.Celecoxib干預(yù)下的裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)。SGC7901、BGC823細(xì)胞株復(fù)蘇傳代后取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞于裸鼠腋下皮下接種。30d后處死裸鼠后稱(chēng)瘤結(jié)節(jié)重量，抑瘤率的計(jì)算按公式抑瘤率(％)=(對(duì)照組平均瘤重量-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重量)/對(duì)照組平均瘤重量×1

5、00計(jì)算抑瘤率。 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用x2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)以x±s表示，P＜0.05表示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著，P＜0.01表示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異非常顯著。 [結(jié)果] 1.胃癌組織(胃癌組織按有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床病理分期即早期、進(jìn)展期，組織病理分期即高中分化、低未分化三種標(biāo)準(zhǔn)分類(lèi))與癌旁組織中的COX-2表達(dá)存在顯著差異。 2.Celecoxib對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901、BGC823均有抑制作用，表現(xiàn)出劑量依賴(lài)性和時(shí)間依

6、賴(lài)性，對(duì)中分化的SGC7901細(xì)胞的抑制作用小于低分化的BGC823細(xì)胞。 3.Celecoxib對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901、BGC823分泌VEGF均有抑制作用，隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其VEGF分泌量也相應(yīng)降低。 4.Celecoxib對(duì)兩種胃癌細(xì)胞系裸鼠動(dòng)物模型的腫瘤生長(zhǎng)均有不同程度的抑制，表現(xiàn)出劑量和時(shí)間依賴(lài)性，BGC823抑瘤率要高于SGC7901，但差異無(wú)顯著性(P＞0.1)。 [結(jié)論]