幾丁質(zhì)酶產(chǎn)生菌的篩選及初步應用的研究.pdf

1、湖南農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文幾丁質(zhì)酶產(chǎn)生菌的篩選及初步應用的研究姓名：唐勇軍申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：盧向陽2003.6.1中史摘要產(chǎn)生透明圈的培養(yǎng)基選用分離培養(yǎng)基。將土樣(棉田土、稻田土、桔園土、池塘底泥、水產(chǎn)養(yǎng)殖場的泥土等)或植物器官(水稻、棉花、玉米、煙葉及一些蔬菜的根、莖、葉)用無菌水稀釋(梯度稀釋法)，在稀釋倍數(shù)為10～、10～、10“時分別取O5ml涂于分離培養(yǎng)基中，300(2培養(yǎng)3～5天，觀察透明圈

2、是否產(chǎn)生。二次分離：繼續(xù)培養(yǎng)得到的菌株，同樣用梯度稀釋法在分離培養(yǎng)基中培養(yǎng)菌株單個菌落，觀察其在分離培養(yǎng)基中生長情況。根據(jù)生長情況和產(chǎn)生透明圈的大小選出較好的菌株。三次分離：在含稻瘟病病原菌細胞壁成分的培養(yǎng)基的平板上培養(yǎng)，在二次分離的基礎(chǔ)E，觀察篩選菌株的生長情況，并檢測菌株的幾丁質(zhì)酶活性。微生物幾丁質(zhì)酶活性測定方法：參照Ace介紹的方法。抑菌實驗的方法：參照檀建新和李力介紹的方法。過氧化氫酶活性測定：按照《植物生理生化實驗》中介紹的方

3、法進行。過氧化物酶活性測定方法：按照《生化實驗技術(shù)方法和技術(shù)》中介紹的方法進行。苯丙氨酸解氨酶活性和植物幾丁質(zhì)酶活性測定方法：按照《現(xiàn)代植物生理學實驗指南》中介紹的方法進行?！窘Y(jié)果】1從自然界中篩選到兩株產(chǎn)酶能力較強的幾丁質(zhì)酶產(chǎn)生菌，分別編號為H3和H9。仞步鑒定結(jié)果，H3菌株為蘇云金芽孢桿菌，H9可能為青霉菌。2產(chǎn)酶條件：H3菌株以細粉幾丁質(zhì)和酵母粉為C源和N源，在30。C、pH72下培養(yǎng)72小時為最佳產(chǎn)酶條件：H9菌株以細粉幾丁質(zhì)和

4、酵母粉為C源和N源，在35℃，pH69。F，培養(yǎng)84小時為最佳產(chǎn)酶條件。33和H9菌株對幾種病原真菌有明顯抑制作用，H3對稻瘟病、水稻紋桔病、棉花枯萎扁、小麥赤霉病、黃瓜枯萎病的抑菌率分別為731％、443％、625％、508％、563％；H9對它們的抑菌率分別為58，2％、455％、563％、272％、366％。1H3菌株發(fā)酵液處理水稻種子后，接種稻瘟病，培兩優(yōu)288出茁率、苗高、百苗干物重分別為315％，lI216cm、195o08

5、9；旱干127出苗率、苗高、百苗干物重分別為65％、12521cm、167ollg；新香優(yōu)80出苗率、苗高、百苗干物重分別為42％、13222cm、20640149。H9菌株發(fā)酵液處理后，培兩優(yōu)288出茁率、菌|商、百苗干物重分別為33％、81l6cm、187o069。早干127出苗率、苗高、百苗干物重分別為57j％、11422cm、159o079：新香優(yōu)80出苗率、苗高、百苗F物重分別為35％、11530cm、2100159。與對照相