小鼠胚胎極性及相關(guān)問題的研究.pdf

1、哺乳動物早期胚胎發(fā)育機制仍然存在爭議。哺乳動物囊胚形態(tài)發(fā)生有其特殊之處，囊胚中包含后期胚胎發(fā)育的胚外部分。哺乳動物囊胚表現(xiàn)出明顯的不對稱性，包括胚胎一側(cè)的內(nèi)細胞團和另一側(cè)被滋養(yǎng)層包圍的囊胚腔。內(nèi)細胞團的位置，即極滋養(yǎng)層的位置決定了胚胎-胚外軸，為后期胚胎發(fā)育圖式提供了基礎(chǔ)，胚胎-胚外軸決定后期胚胎發(fā)育的背-腹軸。現(xiàn)在存在的核心問題是囊胚的這種明顯的不對稱性是否在早期卵裂時就已經(jīng)決定?是否有某種潛在的機制決定了這種胚胎發(fā)育形式?是否和一些

2、非哺乳動物相似，一些位置信息決定了這種胚胎發(fā)育形式?本實驗以小鼠為實驗?zāi)Ｐ?，用對細胞無毒的FITC標記的右旋糖苷和TMR標記的右旋糖苷標記2-細胞胚胎的兩個卵裂球，跟蹤其發(fā)育命運，來研究囊胚Em-Ab極性如何形成；通過透明帶切割、胚胎分割和嵌合胚胎制作的方法，研究精子穿入位置、早期胚胎分裂方式和胚胎極性的關(guān)系。 實驗結(jié)果如下： 1.2-細胞胚胎兩個卵裂球的后代在囊胚中分布并沒有一定的規(guī)律。它們隨機的分布在囊胚的胚胎部分和

3、胚外部分。 2.hCG后13到15小時，大多數(shù)1-細胞胚胎第一極體與精子穿入位置相鄰。 3.精子穿入位置對2-細胞胚胎卵裂球分裂順序沒有影響，含精子穿入位置的卵裂球沒有先分裂的趨勢。 4.分割2-細胞胚胎兩個卵裂球，含精子穿入位置的卵裂球在分裂能力、發(fā)育到囊胚的能力以及囊胚細胞數(shù)上沒有顯著差異。兩個含精子穿入位置卵裂球組成的嵌合胚胎在發(fā)育能力上和兩個不含精子穿入位置的嵌合胚胎沒有顯著差異。 5.3-細胞胚

4、胎分割后，大卵裂球的半胚胎和兩個小卵裂球的半胚胎經(jīng)體外培養(yǎng)后囊胚率及囊胚細胞數(shù)差異不顯著。3-細胞兩個大卵裂球制作的嵌合胚胎和四個小卵裂球制作的嵌合胚胎經(jīng)過體外培養(yǎng)后囊胚率和囊胚細胞數(shù)差異不顯著。 6.外部壓力能影響囊胚腔位置，但去除透明帶的胚胎發(fā)育到囊胚時也能形成正常的胚胎-胚外軸。 這些結(jié)果表明了小鼠胚胎極性和精子穿入位置并沒有特定關(guān)系，2-細胞時，小鼠胚胎極性并未形成。透明帶對胚體的壓力對小鼠胚胎極性形成有一定作用