外源性SOCS-3對(duì)異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞凋亡和增殖的影響研究.pdf

1、背景:
　　子宮內(nèi)膜異位癥（內(nèi)異癥）是一種常見(jiàn)的婦產(chǎn)科疾病，在育齡女性中的發(fā)病率可達(dá)8％-10％，臨床上常表現(xiàn)為痛經(jīng)、慢性盆腔痛、性交不適、不孕等癥狀，嚴(yán)重影響女性的生活質(zhì)量。內(nèi)異癥雖然是一種良性疾病，但卻具有惡性腫瘤的特點(diǎn)，如增殖、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等。對(duì)于該病的發(fā)病有多種學(xué)說(shuō)進(jìn)行解釋?zhuān)珞w腔上皮化生學(xué)說(shuō)、淋巴血管轉(zhuǎn)移學(xué)說(shuō)、干細(xì)胞學(xué)說(shuō)、在位內(nèi)膜決定論等等，其具體發(fā)病機(jī)制目前尚無(wú)定論，最廣為接受的仍然是Sampson的經(jīng)血逆流學(xué)說(shuō)。但是

2、異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞要在子宮腔及子宮肌層以外的部位生長(zhǎng)增殖并形成內(nèi)異病灶，則需要抵抗對(duì)機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)具有維護(hù)作用的細(xì)胞凋亡的發(fā)生。我們可以試圖對(duì)參與細(xì)胞增殖及凋亡的相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)行探索，從而為研究?jī)?nèi)異癥的發(fā)病機(jī)制和治療方案提供新的思路。
　　Janus激酶/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子（Janus kinase/signal transducer andactivator of transcription，JAK/STAT）是目前研究較多的

3、一條信號(hào)通路，該通路廣泛參與細(xì)胞的增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移、血管生成等過(guò)程。而細(xì)胞因子信號(hào)抑制因子(Suppressor of cytokine signaling，SOCS)是JAK/STAT信號(hào)通路的主要負(fù)反饋調(diào)節(jié)因子，其表達(dá)及活性對(duì)調(diào)節(jié)該通路發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤細(xì)胞中均存在STAT-3的活性形式p-STAT-3的異常高表達(dá)及SOCS-3表達(dá)量的下調(diào)，且運(yùn)用JAK-2特異性抑制劑AG490或外源性導(dǎo)入SOCS-3后可通過(guò)抑制p-

4、STAT-3，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖受阻，同時(shí)可促進(jìn)細(xì)胞凋亡，最終達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。而內(nèi)異癥雖為良性疾病，但在許多生物學(xué)行為上具有與惡性腫瘤相似的特點(diǎn)，如過(guò)度增殖、凋亡抑制、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等。我們的前期研究也發(fā)現(xiàn)，異位子宮內(nèi)膜組織與在位及正常子宮內(nèi)膜組織相比較，存在p-STAT-3的高表達(dá)及SOCS-3的下調(diào)，進(jìn)而我們推測(cè)異位子宮內(nèi)膜中p-STAT-3和SOCS-3的異常表達(dá)及相互作用可能參與了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。因此本研究利

5、用慢病毒載體向異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞(Ectopic endometrial stromal cells，EESCs)導(dǎo)入外源性SOCS-3，觀察SOCS-3上調(diào)后對(duì)EESCs中JAK/STAT-3信號(hào)通路的影響及其對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)控。
　　方法:
　　選取12例卵巢型內(nèi)異癥患者的異位子宮內(nèi)膜囊壁進(jìn)行細(xì)胞原代培養(yǎng)，獲取EESCs，波形蛋白染色對(duì)EESCs進(jìn)行純度鑒定;利用重組構(gòu)建的SOCS-3和GFP融合表達(dá)的慢病毒載體（

6、LV-SOCS3-GFP）感染實(shí)驗(yàn)組EESCs，使其過(guò)表達(dá)SOCS-3，同時(shí)利用僅攜帶綠色熒光蛋白(GFP)基因序列的慢病毒載體(LV-GFP)感染同源EESCs，設(shè)為陰性對(duì)照組，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞經(jīng)慢病毒感染后GFP的表達(dá)，評(píng)估感染效率;Real-Time PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中SOCS-3、 JAK-2、STAT-3 mRNA表達(dá)水平;Western Blot檢測(cè)SOCS-3、JAK-2、STAT-3蛋白表達(dá)情況，以及JAK-2、S

7、TAT-3蛋白的磷酸化水平(p-JAK-2、p-STAT-3);流式細(xì)胞儀檢測(cè)SOCS-3過(guò)表達(dá)后對(duì)EESCs凋亡及周期的影響。
　　結(jié)果:
　　慢病毒載體感染EESCs72h后，感染效率可達(dá)90％以上;實(shí)驗(yàn)組SOCS-3mRNA水平明顯上調(diào)，與陰性對(duì)照組比較具有顯著差異(P＜0.001)，JAK-2、STAT-3 mRNA表達(dá)與陰性對(duì)照組無(wú)顯著差異;實(shí)驗(yàn)組SOCS-3蛋白表達(dá)明顯上升，同時(shí)出現(xiàn)p-STAT-3蛋白表達(dá)的下調(diào)